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真菌蛋白提取试剂盒-大型真菌
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详细内容
真菌蛋白提取试剂盒-大型真菌
产品货号:XY9-3127
产品规格及价格:50T/700元;100T/1100元
产品简介:
真菌蛋白提取试剂盒适用于从各种大型真菌(蕈菌)类样本中提取总蛋白。试剂盒组分针对厚细胞壁样本进行优化,提取过程简单方便,可在1小时内完成。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份,包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
产品应用:
WB,IP 等
产品特点:
1.使用方便,从昆虫类细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法:
使用注意事项:
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在 2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或 37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测,提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,
注意提取过程保持低温操作,缩短离心时间。
1. 提取液制备:
每 500 µl 冷的提取液 A 中加入 5 µl 提取液 B 和 2 µl 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取 100-200 mg 真菌组织样本用手术剪刀尽可能剪碎,将样本进行液氮研磨。
3. 研磨后加入 500 µl 提取液 A 充分混匀。
4. 在 4℃条件下振荡 20-30 分钟。
5. 在 4℃,12000×g 条件下离心 10 分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到真菌总蛋白。
7. 上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析:
1.蛋白浓度低?
处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂 A 的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
试剂 A 用量可以根据情况进行调整,样本较小时减少试剂 A 每次用量。
2.用什么方法定量蛋白?
建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法,因为试剂 A 中含有干扰 Bradford 法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用 Bradford 法定量。
3.提取时出现胶状沉淀?
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的特定蛋白的情况下,可以直接离心取上清进行后续实验即可;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理,300w/10 秒间隔 10 秒,超声 3 分钟,随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子,例如 NF-kappaB、p53 等时,不必进行超声处理。
4.提取的蛋白具有活性吗?
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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