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Benzonase 核酸酶残留检测试剂盒
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详细内容
Benzonase 核酸酶残留检测试剂盒
描述:Benzonase 可高效降解任何形式的核酸, 广泛用于
蛋白等生物制品中核酸的去除。在处理过的生物制品中,可
能存在微量 Benzonase 残留,这些微量残留会对后续生物
制品的应用造成一定的影响。生物制品中 Benzonase 的残
留 量 是 衡 量 生 物 制 品 质 量 的 重 要 指 标 之 一 。 目 前 ,
Benzonase 核酸酶残留检测多基于免疫吸附 ELISA 的检测
方法, 由于其方法自身的限制,测量并不准确,主要体现
在以下方面:
(1)检测抗体的亲和性能差异大,受环境影响
大;
(2)检测抗体的非特异性交叉反应;
(3)生物制品本身
蛋白浓度差异,造成的亲和吸附差异。
研发的基于荧光探针的 Benzonase 核酸酶残
留检测方案,成功避开以上缺点,实现了高重复性、高准确
度、高灵敏度检测。在无 Benzonase 核酸酶的样品中,该
探针是稳定存在的,不会产生荧光信号;含有核酸酶残留的
样品中,核酸酶可将荧光标记的 DNA 探针切割,从而产生
逐渐增强的荧光信号。该方法可检测 1.5~50ng/ml 的核酸酶
残留,操作简单,只需加入 Benz Detection Solution 和待检
样品,在定量 PCR 仪上 15min 内即高准确度完成检测。
组分
应用:
重组蛋白或其它生物制品中的核酸酶残留检测。
特别注意事项:
该制品于 生产的 Benzonase 核酸酶(C2001-C2004),其它供应商生产的制品,可能不适用,无法提供数据支持。
保存:
-20℃保存 6 个月,-80℃保存 18 个月。

1. 准备工作
1.1 由于 Benzonase 核酸酶消化迅速,在进行检测操作前务必将定量 PCR 仪的程序、样品编号提前设置完毕,检测操作完成后立即上机检测。
1.2 所有试剂,室温融化待用,实验完成后所有试剂再放置于-20℃或-80℃保存。
2. 检测操作
2.1 样品准备
检测,可将待检测样品用样品稀释液稀释 2 倍、5 倍、10 倍后备用。稀释倍数取决于样本中 Benzonase 核酸酶的残留水平。
2.2 荧光定量 PCR 仪设置

定量 PCR 仪的热盖功能设置,不同机型可能不同,如不熟悉设置功能,可联系设备供应商询问。
2.3 加样操作
(1)在每一个 0.2ml EP 管底部(建议采用 8 联管或 96 孔板)加入 20µl 标准品或待检测样品(见实验排表 1)。
(2)所用样品加完后,快速的在每个样品中加入 20µl2×Benz Detection Solution,盖上管盖或膜。手腕用力将样品甩至管底。(本步操作请尽可能快,通常 45s 内完成,缓慢的操作,将影响检测结果准确性),然后迅速将检测样品放置 PCR 仪上运行。
表 1 实验操作工作表

3. 数据处理
3.1 读取荧光信号值
该方案不同于标准定量 PCR 的数据处理方法,并不是去读
取相同荧光值下的 Ct 值,而是读取在固定时间点的荧光信
号(对数形式)。通常可读取 5min(Ct10)~10min(Ct30)
之内的数值,通常读取 8min 时间点的荧光信号值,即 Ct16
的荧光信号值。以下为使用 BioRad-Opticon2 机型进行检测
的结果。
图 1:反应曲线
3.2 根据标准品荧光信号值制作标准曲线
采用 Excel 进行标准曲线制作,采用幂函数,X 轴为荧光信
号值,Y 轴为标准品浓度。
图 2 标准曲线
3.3 计算检测样本中 Benzonase 含量
根据标准曲线中的计算公式,将检测样品的荧光值(x 轴)换
算成 Benzonase 核酸酶残留量(ng/ml,y 轴)。
Benzonase 含量(y)=稀释倍数×1.6897e5.1
数据处理中的注意事项
1. 通常样本中 Benzonase 核酸酶残留量低于标准品 F(1.5ng/ml)时,无法检出。报告形式为 Benzonase 核酸酶残留量<1.5ng/ml。
2. 检测样品稀释后产物的荧光值仍然高于标准品 A(25ng/ml)的荧光信号值,则需要将样本继续稀释后再进行检测。
3. 不同的荧光 PCR 机型,可能在数据表现形式上存在差异,但原则不变,原理为短时间内的荧光增加量代表 Benzonase核酸酶含量。
4. 如果您对数据处理比较疑惑,可将结果发送至我处,有我处协助数据处理。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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