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Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒
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详细内容
Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒
描述:细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。
AnnexinV 是一种分子量为 35~36kD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸
(Phosphatidylserine,PS)高亲和力特异性结合。以标记了 FITC 的 AnnexinV 作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微
镜可检测细胞凋亡的发生。 Propidium iodide(PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期和死细胞由
于细胞膜破裂,因此 PI 能够将细胞核染红。将 AnnexinV 与 PI 匹配使用,可以区分活细胞(FITC/PI 均为阴性)、凋亡早期
细胞(FITC 阳性、PI 均为阴性)、凋亡晚期或死细胞(FITC/PI 均为阳性)。
本试剂盒使用改进型的高纯度 FITC 染料,其在红色通道(690nm)无发射光,因此极大的减少了对红色通道的干扰。使用
该试剂盒进行细胞凋亡检测时荧光相互干扰更小、检测更准确。
组分
储存: 2~8℃,有效期 1 年。

注意事项
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞。
2. 反应完毕后请尽快检测,反应 1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质,在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水(1:9)稀释至 1×备用。
操作步骤:
1. 贴壁细胞:用胰酶消化至单细胞悬液; 悬浮细胞:可直接使用。
2. 1000rpm(400g),离心 5min,弃上清。
3. 加入 1ml PBS,轻轻吹打使细胞悬浮,1000rpm,离心 5min,弃上清。
4. 再重复步骤 3 一次,尽可能吸除多余的 PBS 溶液;
5. 加入 1×Annexin V Binding Buffer 重悬细胞,使细胞密度为 0.2~1×106 个/ml。
注意:a.必须使用 1×Annexin V Binding Buffer 重悬细胞(不可使用 PBS 重悬,否则会导致 AnnexinV 无法结合 PS 位点);
b.将细胞悬液用 200 目筛网过滤一次,再进行下述操作将有助于获得最佳试验结果。
6. 取 100µl 上述细胞重悬液,加入 5µl Annexin V-FITC、5µl PI Staining Solution 混合均匀,室温避光放置 15min。
7. 反应结束后加 400µl Binding Buffer 轻轻混匀在 1 小时内上流式细胞仪检测。
注意:a. 流式细胞仪要求配备 488nm 激发光源;FITC 使用绿色通道检测(525nm);PI 推荐使用红色通道检测(690nm),PI 也可使用黄色通道检测(580nm),但黄色通道必须进行荧光补偿操作。
b. 本试剂采用高纯度改进型 FITC 染料,其无法在红色通道检测,因此采用绿色通道和红色通道进行检测时,通常无需荧光补偿操作。
8. 若用荧光显微镜检测,将细胞混合液离心,取细胞沉淀涂片,再进行观察。
实验实例-药物对细胞凋亡的影响:(A)未添加药物的肿瘤细胞;(B)添加药物的肿瘤细胞
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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