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T7 ARCA加帽加尾 mRNA合成试剂盒
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详细内容
T7 ARCA加帽加尾 mRNA合成试剂盒
描述:大多数真核 mRNA 的高效翻译需要在 5’末端有一个 7-甲基鸟苷帽结构、3’末端有一个 Poly(A)尾。T7 ARCA加帽加尾 RNA 合成试剂盒可以快速的体外合成带帽带尾的 mRNA。T7 RNA 聚合酶通过转录,将抗-反向帽类似物(ARCA)加到 mRNA 上。经 DNase I 短暂温育可以去除模板 DNA,并在 Poly(A)聚合酶的作用下,为加帽的mRNA 加 Poly(A)尾。利用该试剂盒得到的 RNA 适用于多种下游应用,如 RNA 结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase 保护分析探针、印迹杂交、反义 RNA 及RNAi 实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和 RNA疫苗等。
T7 RNA 聚合酶识别 T7 promoter(TTCTAATACGACTCACTATAGG)以方框中 G 碱基为起点开始转录,该试剂盒可以从少量样本得到高效转录,单次反应可获得>30 µg 的 mRNA 产物,转录长度可达 4000nt 以上。
转录产物 80%以上含有 7-甲基鸟苷帽结构、Poly(A)尾长度>80nt。
原理:
组分
保存: -20℃可保存 2 年,避免反复冻融。

操作步骤:
(1)按以下组分配制转录反应液

(2)37℃反应 1~2h,转录带帽 RNA 产量在 20~30µg。
(3)转录完毕后,向上述反应液中加入 2µL RNase FreeDNase I,37℃孵育 15min 去除 DNA 模板。
(4)进行加尾反应

放置 37℃反应 30~60min 完成加 Poly(A)尾。
(5)反应完毕后,可电泳检测或放置-80℃保存。或选用5min RNA Purification Kit 进行转录RNA 的纯化,以去除盐、NTP、蛋白等。
注意事项:该产品仅供科研使用,不得用于临床诊断及其他用途,产品说明书以到货说明书为准,网站说明书仅供参考!
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