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一步法sgRNA 合成试剂盒
价格：￥ 25T/1750
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:04:09
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详细内容
一步法sgRNA 合成试剂盒
描述：CRISPR/Cas9 是一种由 RNA 指导 Cas 核酸酶对靶向基因进行特定 DNA 修饰的技术，也是细菌和古细菌为应对噬菌体和外源质粒的攻击而演化来的一种获得性免疫防御机制。此系统的工作原理是通过人工优化的具有引导作用的 sgRNA(Single Guide RNA)引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 sgRNA 配对的靶位点处剪切双链 DNA，引起 DNA 断裂，进而利用生物体内非同源末端修复机制或同源重组机制修复 DNA，导致基因移码突变、替换或删除，致使基因功能丧失。
sgRNA 的体外合成通常有两种策略：一种为构建含特异性序列的转录质粒，另一种则使用合成的 oligo 退火延伸生成含 T7 转录启动子的双链 DNA 分子，进而再使用 T7 RNA 聚合酶进行体外转录，从而获得 sgRNA。利用合成的Oligo 直接制备 sgRNA，具有操作简单快速、可实现高通量等优势，已经成为体外合成 sgRNA 的方案。Cas9 的切割是通过向导 RNA(gRNA)与靶 DNA 形成约 20bp 碱基的配对，且靶序列的 3’端需要有 PAM 结构(NGG)，再引导Cas9作用实现的。本试剂盒可通过一步反应获得高纯度、高产量的sgRNA，仅需要合成一条含有特定靶标序列的Oligo，可最短在 4h 内获得 50~80µg 的 sgRNA。
组分
注意：Positive Sense sgRNA Oligo 为阳性对照品，在实验时可用于质控反应体系。
保存：-20℃可保存 2 年，避免反复冻融。
原理
一步法 sgRNA 合成试剂盒
One-Step sgRNA Synthesis Kit
Cat. No.: D0601 25T Store at: -20℃
操作步骤：
1. 如何设计靶标基因的 Sense sgRNA Oligo
1. 1 根据目标基因组序列选取靶 sgRNA 位点，如下例，红色标识靶位点，黄色标识 PAM 序列(NGG)
2. 转录 sgRNA 体系的配制
2.1 按以下组分配制反应液（按顺序加入）
注意：Sense sgRNA Oligo 需要自行设计并合成，本试剂提供的 Positive Sense sgRNA Oligo 作为实验质控品。
2.2 37℃反应 4h，转录 RNA 产量在 50~80 µg。
2.3 转录完成后，向反应液中加入 2.5 µl 的 10xRD Buffer 和 2 µl RNase Free DNase I，37℃孵育 15min 去除 DNA模板。
2.4 反应完毕后，可取 0.1µl 进行电泳检测或放置-80℃保存。
2.5 选用 LiCl 沉淀或 5min RNA Purification Kit 进行转录 RNA 的纯化，以去除盐、NTP、蛋白等。
注意事项：该产品仅供科研使用，不得用于临床诊断及其他用途，产品说明书以到货说明书为准，网站说明书仅供参考！
热门标签：一步法sgRNA,合成试剂盒,一步法sgRNA,合成试剂盒
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