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活细胞/死细胞双染试剂盒(绿色/红色荧光)
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详细内容
活细胞/死细胞双染试剂盒(绿色/红色荧光)
产品货号:XY9-412653
产品规格及价格:500T/2100元;1000T/3400元
产品简介:
活细胞 / 死细胞双染试剂盒(绿色 / 红色荧光)是一种用于区分活细胞和死细胞的试剂盒,通过不同荧光染料对活细胞和死细胞进行特异性染色,从而在荧光显微镜或流式细胞仪等设备下观察和分析细胞活力。以下是相关介绍:
工作原理
活细胞染色原理:试剂盒中的 Calcein AM 是一种亲脂性化合物,能自由穿过活细胞膜。进入细胞后,它被细胞内的酯酶水解,生成具有强绿色荧光的 Calcein,由于死细胞缺乏酯酶活性,无法产生绿色荧光,因此 Calcein AM 仅对活细胞染色。
死细胞染色原理:碘化丙啶(PI)或 Ethidium homodimer-1(EthD-I)等染料不能透过活细胞膜,但死细胞的细胞膜通透性增加,这些染料可以进入细胞与双链 DNA 结合,发出红色荧光,从而标记死细胞。
主要成分
常见的试剂盒包含 Calcein AM、PI 或 EthD-I 等荧光染料,以及相应的溶解试剂和缓冲液。如 Proteintech 的活 / 死细胞染色试剂盒(Calcein AM,EthD-I 法),含有 4 mM 的 Calcein AM(溶于无水 DMSO)和 2 mM 的 EthD-I(溶于 DMSO/H₂O 1:4(v/v))。
操作步骤
准备工作:取出试剂恢复至室温,用 PBS 等缓冲液清洗细胞 2-3 次。
配制工作液:将 Calcein AM 和 PI 或 EthD-I 原液按一定比例与 PBS 或其他无血清缓冲液混合,如将 20 µL 2 mM 的 EthD-I 和 5 µL 4 mM 的 Calcein AM 与 10 mL PBS 混合,配制成染色工作液。
细胞染色:用染色工作液悬浮细胞,控制细胞密度为 1-5×10⁵/mL,室温避光孵育 15-20 分钟。
检测观察:在 30 分钟内,通过荧光显微镜或流式细胞仪等设备检测细胞活性,Calcein AM 可被 488 nm 或 490 nm 激光激发,发射绿光,PI 或 EthD-I 被 535 nm 左右激光激发,发射红光。
应用领域
主要应用于细胞生物学研究,可用于检测细胞活性、细胞毒性实验、细胞培养过程中的质量控制等,适用于大多数真核哺乳动物细胞,包括贴壁细胞、悬浮细胞和某些组织,但不适用于真菌和酵母。
注意事项
荧光染料易淬灭,保存和使用过程中应尽量避光。
Calcein AM 容易水解,需密封干燥保存,稀释后的工作液需当天配制。
PI 具有高度致癌性,操作时应戴手套、护目镜等防护装备。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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