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葡萄糖摄取检测试剂盒-绿色荧光
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详细内容
葡萄糖摄取检测试剂盒-绿色荧光
产品货号:XY9-48512
产品规格及价格:200T/7900元
产品简介:
葡萄糖摄取检测试剂盒(Glucose Uptake Assay Kit)是采用开发的 G61非代谢葡萄糖类似物荧光探针提供灵敏的非放射性分析,检测培养细胞中的葡萄糖摄取情况的试剂盒。
G61荧光葡萄糖类似物通过与葡萄糖相同的葡萄糖转运蛋白(GLUT)转运到细胞中,进入细胞后在C-6位置发生磷酸化,并很好地保留在细胞内,可以在单细胞水平上进行高时间和空间分辨率的原位检测。荧光葡萄糖类似物的摄取量反映细胞葡萄糖的摄取情况,
产品特点:
1.使用方便:操作步骤简单;
2.安全:无需处理放射性物质。;
3.线性范围宽,可检测葡萄糖摄取的微小变化。

使用方法:
1.预实验很重要。必须要做预实验,在正式实验之前取少量样本优化实验条件,并像正式样本一样认真进行,看实验结果是否可行,实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性,不同样本的实验条件通常差异较大,同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同,为了避免浪费正式样本和试剂,一定要提前预实验优化实验条件。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
3. G61 染色液为 DMSO 溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使 DMSO 溶液集中于管底。
试剂准备:
根据样本数量,用 37℃预热的不含葡萄糖的培养基将 G61 探针 500-1000 倍稀释。充分混匀,配制成染色工作液,备用。
根据样本数量,用洗涤液 B2 将洗涤液 B1 进行 20 倍稀释,配制成洗涤液 B,然后用冰浴的 HBSS 将洗涤液 B进行 50 倍稀释。充分混匀,配制成洗涤液工作液,冰浴备用。
样本检测:
1. 将细胞接种到培养皿或孔板中,制备相应的待检测模型。
【注】:
以下以贴壁细胞原位检测为例,悬浮细胞按相应步骤操作即可。需流式检测时,用胰酶 消化收集细胞。
2. 培养好的待测细胞去除培养基,用预热的不含葡萄糖的培养基清洗 2-3 次。
3. 添加预热的不含葡萄糖的培养基,37℃、5% CO2 培养箱中培养 15-20 min。
4. 去除培养基,加入预热的染色工作液,37℃、5% CO2 培养箱中培养 15 min。
【注】:
染色工作液用量以相应的培养器皿的培养基量为准。例如 24 孔板一般用 300 µl 染色液。以有效覆盖细胞为准。
不同样本的最佳染色时间不同,需要根据预实验结果调整。一般在 5-60 分钟范围内调整染色时间。15 分钟适用于很多常见样本。
必须使用 37℃预热的染色工作液。
5. 去除染色液,用预冷的洗涤液工作液清洗 2 次。
【注】:
加入洗涤液后轻微晃动然后直接移除即可。
必须使用预冷的洗涤液工作液。
6. 去除洗涤液,添加预冷的洗涤液工作液,室温静置 5 min。
【注】:
此步骤必须静置 5 分钟,为第三次洗涤的必要步骤,有利于减少背景。
如果背景高,可以再洗涤第 4 次。
必须使用预冷的洗涤液工作液。
7. 去除洗涤液,添加预冷的洗涤液工作液,用共聚焦显微镜进行拍照分析。
常见问题分析:
1.活细胞染色后,可以进行细胞固定的操作吗??
由于固定操作时荧光探针会从细胞内漏出,染色后不能进行细胞固定。
2.用荧光酶标仪检测,对微孔板有什么特别要求吗?
需要使用荧光检测用的细胞培养板。
3.被细胞摄入后,会被分解或代谢掉吗?
实验过程中的操作不会造成分解。
4.无法观察到荧光信号变化,是什么原因?
可能时由于染色条件需要优化。预实验的时候可以先从稀释浓度(250 倍~1000 倍)、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。
5.荧光染料可以在细胞内停留多长时间?
一般在室温下可以保持在细胞内 1 小时左右,不同的细胞种类,时间会有一定差别。
6.试剂盒可以定量吗?
不可以定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的定性检测试剂盒。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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