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Green Fluorescent FAM Caspase-4检测试剂盒(FLICA)
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详细内容
Green Fluorescent FAM Caspase-4检测试剂盒(FLICA)
产品货号:XY9-486271
产品规格及价格:50T/1700元;100T/2700元
产品简介:
Green Fluorescent FAM Caspase-4 检测试剂盒(FLICA)是一种用于检测细胞中 Caspase-4 活性的工具
产品应用:
荧光酶标仪/荧光显微镜/流式细胞仪

检测原理
试剂盒中的荧光标记抑制剂(FLICA)含有与 Caspase-4 特异性结合的氨基酸序列,以及绿色荧光基团羧基荧光素(FAM)。FLICA 能够透过完整的细胞膜进入细胞内,若细胞内存在活性的 Caspase-4,FLICA 就会与之共价结合,形成稳定的复合物。未结合的 FLICA 则会扩散出细胞,经洗涤步骤被去除。,通过检测细胞内留存的绿色荧光信号,即可直接反映出 Caspase-4 的活性水平。
试剂盒组成
FAM 标记的 Caspase-4 特异性抑制剂:即 FLICA 试剂,是试剂盒的关键成分,用于特异性识别并结合活性 Caspase-4。
洗涤缓冲液:一般为 10X 浓缩液,使用时需稀释为 1X 工作液,用于洗涤细胞,去除未结合的 FLICA 试剂及其他杂质。
固定液:用于固定细胞,保持细胞形态和抗原性,便于后续检测,但需注意在染色和洗涤步骤完成后再使用,以免影响 FLICA 与 Caspase-4 的结合。
其他试剂:部分试剂盒可能还会包含如 Hoechst 33342 等核染料,用于对细胞核进行染色,以便在荧光显微镜下同时观察细胞形态和 Caspase-4 的活性分布。
操作步骤
样品准备:收集待检测的细胞,包括悬浮细胞或贴壁细胞。对于贴壁细胞,需先用胰酶消化使其脱落,然后离心收集细胞沉淀,并用 PBS 等缓冲液洗涤细胞,去除培养基中的血清等成分,以免干扰检测。
FLICA 试剂孵育:将适量的 FLICA 试剂用 DMSO 等溶剂溶解后,再用 PBS 或无血清培养基稀释至合适浓度,加入到细胞样品中,在细胞培养箱中孵育一定时间,通常为 30 分钟至 1 小时,以使 FLICA 试剂充分进入细胞并与活性 Caspase-4 结合。
洗涤细胞:孵育结束后,离心去除上清液,用预冷的 1X 洗涤缓冲液洗涤细胞 3 次,每次轻轻重悬细胞,然后离心弃去上清,以去除未结合的 FLICA 试剂。
固定细胞:若需要对细胞进行固定,可加入适量的固定液,室温下固定细胞 15-30 分钟,固定完成后,再用洗涤缓冲液洗涤细胞 1-2 次。
检测分析:将处理好的细胞样品转移至荧光显微镜载玻片或 96 孔板等检测平台上,使用荧光显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪等仪器进行检测,观察或测量细胞内的绿色荧光信号强度。
应用领域
细胞凋亡研究:Caspase-4 在细胞凋亡过程中发挥着重要作用,通过检测 Caspase-4 的活性变化,可了解细胞凋亡的发生和进展情况,研究凋亡相关信号通路的调控机制。
炎症研究:Caspase-4 与炎症反应密切相关,参与炎症小体的激活和炎症因子的释放,可用于研究炎症性疾病的发病机制,筛选抗炎药物等。
药物研发:在药物研发过程中,可利用该试剂盒评估药物对 Caspase-4 活性的影响,判断药物是否具有诱导细胞凋亡或调节炎症反应的作用,为药物的筛选和优化提供依据。
注意事项
试剂保存:试剂盒应保存在 2-8℃的冰箱中,避免冷冻和光照,以防止试剂失效。
细胞处理:在细胞培养和处理过程中,要注意保持细胞的活性和状态,避免细胞受到过度损伤或应激,影响 Caspase-4 的活性检测结果。
对照设置:为了确保实验结果的准确性和可靠性,应设置阳性对照和阴性对照。阳性对照可采用已知能够诱导 Caspase-4 激活的药物或刺激物处理细胞,阴性对照则使用未处理的正常细胞或用 Caspase-4 抑制剂预处理的细胞。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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