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Green Fluorescent FAM Caspase-3检测试剂盒(FLICA)
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详细内容
Green Fluorescent FAM Caspase-3检测试剂盒(FLICA)
产品货号:XY9-486274
产品规格及价格:50T/1700元;100T/2700元
产品简介:
Green Fluorescent FAM Caspase-3 检测试剂盒(FLICA)是一种用于检测细胞内 Caspase-3 活性,进而评估细胞凋亡或焦亡状态的工具
产品应用:
荧光酶标仪/荧光显微镜/流式细胞仪

检测原理
特异性结合:试剂盒中的关键成分是荧光标记的抑制剂探针 FAM-DEVD-FMK,其中 DEVD 是 Caspase-3 和 Caspase⁻⁷ 的特异性识别序列。当细胞发生凋亡或焦亡时,Caspase-3 被激活,FAM-DEVD-FMK 能够与激活状态的 Caspase-3 酶特异性地共价结合。
荧光信号指示:FAM 是一种绿色荧光染料,与 Caspase-3 结合后,会在特定波长的激发光下发出绿色荧光。通过检测绿色荧光的强度和分布,就可以判断细胞内 Caspase-3 的活性水平,进而推断细胞的凋亡或焦亡程度。
试剂盒组成
FAM-DEVD-FMK 试剂:通常为冻干形式,需用二甲基亚砜(DMSO)等溶剂进行复溶后使用。
凋亡洗涤缓冲液:用于在实验过程中洗涤细胞,去除未结合的 FAM-DEVD-FMK 试剂以及其他杂质,一般为 10 倍浓缩液,使用时需稀释至 1 倍工作液。
固定液:用于固定细胞,保持细胞形态和细胞内成分的稳定性,以便后续的检测和分析。
碘化丙啶(PI):一种核酸染料,可用于区分活细胞和死细胞。活细胞的细胞膜完整,PI 无法进入细胞内,而死细胞的细胞膜通透性增加,PI 可以进入细胞并与细胞核中的 DNA 结合,在特定波长激发光下发出红色荧光。
Hoechst 33342:一种细胞核染料,可穿透细胞膜进入细胞,与细胞核中的 DNA 特异性结合,在特定波长激发光下发出蓝色荧光,用于标记细胞核,以便观察细胞的形态和数量。
操作流程
细胞培养:将待检测的细胞接种到合适的培养容器中,在适宜的条件下培养,使其达到对数生长期或实验所需的状态。
加入试剂:向细胞培养液中直接加入复溶后的 FAM-DEVD-FMK 试剂,按照试剂盒说明书推荐的浓度和孵育时间进行孵育,让试剂充分进入细胞并与激活的 Caspase-3 结合。
洗涤细胞:孵育结束后,用凋亡洗涤缓冲液洗涤细胞,去除未结合的 FAM-DEVD-FMK 试剂。
固定细胞:加入固定液对细胞进行固定,一般固定时间为 15-30 分钟。
染色处理:根据实验需求,可加入 PI 和 Hoechst 33342 等染料进行染色,染色时间和浓度按照试剂盒说明书进行操作。
检测分析:使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪等仪器对细胞进行检测,观察和分析绿色荧光(代表 Caspase-3 活性)、红色荧光(代表死细胞)和蓝色荧光(代表细胞核)的强度、分布和比例等指标。
应用领域
细胞凋亡研究:在细胞凋亡过程中,Caspase-3 的激活是一个关键事件。该试剂盒可以用于研究各种因素诱导的细胞凋亡,如药物处理、紫外线照射、生长因子剥夺等对细胞凋亡的影响,帮助揭示细胞凋亡的分子机制和信号通路。
肿瘤研究:肿瘤细胞的凋亡异常与肿瘤的发生、发展、治疗和预后密切相关。通过检测肿瘤细胞内 Caspase-3 的活性,可以评估肿瘤细胞对化疗药物、放疗等治疗手段的敏感性,为肿瘤的个体化治疗提供依据。
神经科学研究:在神经系统疾病如阿尔茨海默病、帕金森病等的研究中,细胞凋亡参与了疾病的病理过程。使用该试剂盒可以研究神经细胞的凋亡情况,探讨疾病的发病机制和寻找潜在的治疗靶点。
免疫学研究:在免疫细胞的发育、分化和免疫应答过程中,细胞凋亡起着重要的调节作用。检测免疫细胞如淋巴细胞、巨噬细胞等的 Caspase-3 活性,有助于了解免疫细胞的功能状态和免疫调节机制。
注意事项
试剂保存:试剂盒中的各组分应按照说明书要求的条件保存,一般需在 2-8℃或 - 20℃下保存,并注意避光。复溶后的 FAM-DEVD-FMK 试剂应尽快使用,如需保存,可在 - 20℃下保存,但解冻次数不宜超过两次。
细胞状态:确保待检测的细胞处于良好的生长状态,避免细胞过度生长或营养不良等因素对实验结果的影响。同时,在实验过程中要注意操作轻柔,避免对细胞造成机械损伤。
对照设置:为了准确评估实验结果,应设置合适的对照组,如阴性对照(未处理的正常细胞)、阳性对照(已知能诱导细胞凋亡的药物或处理组)等。
仪器校准:使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪等仪器前,需对仪器进行校准和调试,确保仪器的检测参数和灵敏度处于最佳状态,以获得准确可靠的实验结果。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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