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Green Fluorescent FAM Caspase-7检测试剂盒(FLICA)
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详细内容
Green Fluorescent FAM Caspase⁻⁷检测试剂盒(FLICA)
产品货号:XY9-486275
产品规格及价格:50T/1700元;100T/2700元
基本原理
特异性结合:试剂盒中的 FAM(羧基荧光素)标记的 FLICA 试剂,能够透过细胞膜进入细胞内部。当细胞发生凋亡或焦亡时,细胞内被激活的 caspase⁻⁷ 会与 FLICA 试剂中的特异性底物结合,这种结合是共价的,形成稳定的复合物。
荧光信号产生:FAM 作为一种荧光基团,在特定波长的激发光照射下会发出绿色荧光。结合了 caspase⁻⁷ 的 FLICA 试剂由于被保留在细胞内,会发出较强的绿色荧光信号;而未结合的 FLICA 试剂则会在后续的洗涤步骤中被去除,不会产生干扰信号,从而通过检测绿色荧光的强度和分布来反映 caspase⁻⁷ 的活性水平。
产品应用:
荧光酶标仪/荧光显微镜/流式细胞仪

试剂盒组成
FAM-DEVD-FMK FLICA 试剂:是核心成分,通常以冻干粉形式存在,需用 DMSO 等溶剂溶解后使用,用于特异性地与活性 caspase⁻⁷ 结合并产生荧光信号。
凋亡洗涤缓冲液:一般为 10× 浓缩液,使用时需稀释成 1× 工作液,用于在实验过程中洗涤细胞,去除未结合的 FLICA 试剂以及其他杂质。
固定液:用于固定细胞,使细胞保持在特定的状态,以便于后续的检测和观察,常用的固定液如多聚甲醛等。
碘化丙啶(PI):一种核酸染料,可用于区分死细胞和活细胞。活细胞的细胞膜完整,PI 无法进入细胞内;而死细胞的细胞膜通透性增加,PI 可以进入细胞并与细胞核中的 DNA 结合,在特定波长激发光下发出红色荧光。
Hoechst 33342:也是一种核酸染料,可与 DNA 结合,在紫外光激发下发出蓝色荧光,用于标记细胞核,以便对细胞进行定位和计数,同时也可用于评估细胞周期。
操作步骤
细胞培养与处理:将待检测的细胞在合适的培养基中培养至对数生长期,并根据实验目的对细胞进行相应的处理,如诱导凋亡或焦亡等。
FLICA 试剂孵育:向细胞培养液中加入适量溶解好的 FAM-DEVD-FMK FLICA 试剂,在细胞培养箱中孵育一段时间,通常为 30 分钟至 1 小时,使 FLICA 试剂能够充分进入细胞并与活性 caspase⁻⁷ 结合。
洗涤细胞:孵育结束后,用凋亡洗涤缓冲液洗涤细胞 2-3 次,去除未结合的 FLICA 试剂。
固定细胞:加入适量的固定液,室温下固定细胞 15-30 分钟,使细胞形态和细胞内的成分保持稳定。
染色与检测:根据需要加入 PI 和 Hoechst 33342 等染料进行复染,然后使用荧光显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪等仪器进行检测,分析细胞的荧光信号强度和分布情况。
应用领域
细胞凋亡研究:在肿瘤研究中,可用于观察肿瘤细胞在药物治疗、放疗、免疫治疗等手段作用下的凋亡情况,评估治疗效果;在神经退行性疾病研究中,检测神经元细胞的凋亡过程,探索疾病的发病机制和病理生理过程。
细胞焦亡研究:在炎症相关疾病的研究中,如败血症、动脉粥样硬化等,用于检测细胞焦亡的发生和发展,了解炎症反应的程度和进程。
药物研发:在药物筛选过程中,可快速筛选出具有诱导细胞凋亡或抑制细胞凋亡、焦亡作用的药物;在药物作用机制研究中,通过检测 caspase⁻⁷ 的活性变化,阐明药物对细胞凋亡或焦亡信号通路的影响。
注意事项
试剂保存:试剂盒应保存在 2-8℃的冰箱中,并注意避光保存,避免试剂失效。
细胞状态:确保细胞在实验前处于良好的生长状态,避免细胞受到过度的机械损伤、化学污染或微生物污染等,以免影响实验结果。
实验对照:设置合适的对照组,如阴性对照(未处理的正常细胞)、阳性对照(已知能诱导细胞凋亡或焦亡的药物处理组)等,以便于对实验结果进行准确的分析和判断。
荧光淬灭:荧光信号容易受到光漂白和荧光淬灭的影响,因此在实验过程中应尽量减少样品暴露在光下的时间,在检测时也应尽快完成操作。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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