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Green Fluorescent FAM Caspase-8检测试剂盒(FLICA)
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详细内容
Green Fluorescent FAM Caspase-8检测试剂盒(FLICA)
产品货号:XY9-486277
产品规格及价格:50T/1700元;100T/2700元
基本原理
特异性结合:试剂盒中的关键试剂是荧光标记的 FLICA 探针,即 FAM-LET D-FMK。其中,LET D 是 Caspase-8 特异性识别的氨基酸序列,FMK 是一种能够与 Caspase-8 活性位点的半胱氨酸残基形成共价键的基团。当细胞发生凋亡时,激活的 Caspase-8 会与 FAM-LET D-FMK 探针特异性结合。
荧光信号检测:FAM 是一种绿色荧光染料,在与 Caspase-8 结合后,会发出绿色荧光。通过荧光显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪等仪器,可以检测到这种荧光信号,从而判断细胞中 Caspase-8 的活性状态,进而推断细胞是否发生凋亡。
产品应用:
荧光酶标仪/荧光显微镜/流式细胞仪

试剂盒组成
FAM-LET D-FMK 试剂:即荧光标记的 Caspase-8 抑制剂,用于与活性 Caspase-8 结合,通常为冻干粉形式,需要在使用前进行复溶。
凋亡洗涤缓冲液:一般为 10X 浓缩液,用于洗涤细胞,去除未结合的试剂和杂质,在使用时需按照比例稀释成工作液。
固定液:用于固定细胞,保持细胞形态和抗原活性,使结合了荧光探针的 Caspase-8 能够稳定存在,便于后续检测。
碘化丙啶(PI):一种核酸染料,可用于区分活细胞和死细胞。活细胞的细胞膜完整,PI 无法进入细胞内,而死细胞的细胞膜通透性增加,PI 可以进入细胞并与 DNA 结合,发出红色荧光。
Hoechst 33342:一种细胞核染料,可与 DNA 结合,发出蓝色荧光,用于标记细胞核,以便在荧光显微镜下观察细胞形态和细胞核变化,同时也可用于区分不同细胞周期的细胞。
操作流程
细胞处理:将待检测的细胞进行培养,并根据实验需要进行诱导凋亡处理,如使用特定的凋亡诱导剂处理细胞。
染色:加入适量复溶后的 FAM-LET D-FMK 试剂,与细胞在合适的条件下孵育一段时间,使试剂能够进入细胞并与活性 Caspase-8 结合。
洗涤:用凋亡洗涤缓冲液洗涤细胞,去除未结合的 FAM-LET D-FMK 试剂。
固定:加入固定液对细胞进行固定。
复染:根据需要,加入 PI 和 Hoechst 33342 等染料对细胞进行复染,以便更好地观察细胞状态。
检测:使用荧光显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪等仪器对细胞进行检测,观察并分析绿色荧光信号的强度和分布,以及 PI 和 Hoechst 33342 的荧光信号,从而判断 Caspase-8 的活性和细胞凋亡情况。
应用领域
细胞凋亡研究:在细胞生物学研究中,用于检测细胞凋亡过程中 Caspase-8 的激活情况,了解细胞凋亡的发生机制和调控途径。
药物研发:筛选和评估具有诱导细胞凋亡或抑制细胞凋亡作用的药物,通过检测药物处理后细胞中 Caspase-8 的活性变化,判断药物的作用效果和作用机制。
疾病机制研究:在癌症、神经退行性疾病等研究中,探究疾病发生发展过程中细胞凋亡的异常情况,以及 Caspase-8 在疾病中的作用,为疾病的诊断和治疗提供理论依据。
注意事项
试剂保存:试剂盒中的试剂应按照说明书要求的条件保存,一般需要在 2-8℃冷藏保存,并注意避光,避免试剂失效。
细胞状态:确保待检测细胞的状态良好,细胞数量和活性符合实验要求,避免因细胞状态不佳而影响检测结果。
实验操作:严格按照试剂盒说明书的操作步骤进行实验,控制好孵育时间、温度、试剂用量等条件,以保证实验结果的准确性和重复性。
荧光淬灭:荧光染料容易发生淬灭,在实验过程中应尽量减少荧光暴露时间,避免强光照射,检测时应尽快完成。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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