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焦亡检测试剂盒（pyroptosis）-荧光法
价格：￥ 25T/2300元；100T/3900元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:03:04
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详细内容
焦亡检测试剂盒（pyroptosis）-荧光法
产品货号：XY9-4862
产品规格及价格：25T/2300元；100T/3900元
产品简介：
细胞焦亡（Pyroptosis）是一种由炎症信号触发的程序性细胞死亡方式，其核心特征是细胞膜穿孔、细胞肿胀破裂，依赖于炎性半胱天冬酶（主要是caspase-1，4，5，11），并伴随大量促炎因子（如IL-1β、IL-18）的释放。细胞焦亡的形态学特征、发生及调控机制等均不同于凋亡、坏死等其他细胞死亡方式。
使用方法：
1. 须自备可以测定 A405 或 A400 的酶标仪或容量不超过 100µl 的分光光度检测杯及相应分光光度计。优先考虑测定 A405。
2. 37℃下反应如果颜色变化不明显，可以适当延长反应时间。
3. 如果样品中蛋白含量低，加大样品量，裂解样品时需设法使样品中的蛋白量达到 200-500ug 每样。
4. 如果样品中激活的焦亡水平很低，适当调节诱导细胞焦亡的时间，找一个焦亡激活比较强的时间点进行检测。
5. 焦亡试剂避光保存，使用过程中尽量避光。
6. 试剂为 DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
7. 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使 DMSO 溶液集中于管底。
8. 每个样需要准备两份，分别用于 caspase 活性检测和细胞膜完整性检测。
一、 裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每 1 ml 缓冲液中加入 10 µl 试剂 D。充分混匀置冰上备用。
二、 样品处理
1. 收集 2-5×106 个以上细胞，在 4℃，500×g 条件下离心 2-3 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入 50 µl 冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡 15 秒。
4. 置冰上持续振荡 25-40 分钟。
5. 在 4℃，10000×g 条件下离心 10 分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
三、 对上述处理过的上清进行蛋白定量。
四、 焦亡检测
1、 取 40-50 µl 大约含 100-200 µg 蛋白的裂解上清，加入 50 µl 检测缓冲液。
2、 加入 10 µl 焦亡试剂 B，充分混匀。在 37℃下避光反应 1-4 小时，有黄色颜色产生即可进行检测。
3、 测定 A405 nm 或 A400 nm。
4、 吸光值与焦亡活性程度成正比。
五、 细胞膜完整性测定
1. 染色工作液的配制：
用纯水将洗涤缓冲液 F（10X）10 倍稀释（1 ml 试剂 F 加 9 ml 纯水充分混匀），充分混匀，配制成洗涤缓冲液工作液（1X）备用。
根据样品数用洗涤缓冲液工作液将焦亡试剂 E 100 倍稀释，配制成染色工作液。
2. 用洗涤缓冲液工作液洗涤细胞两次。
3. 加适量染色工作液于细胞，室温避光染色 5-20 分钟。
4. 用荧光设备检测结果。探针的最大激发波长为 488 nm，最大发射波长为 620 nm。
5. 结果分析 ：
置于荧光设备下检测结果。激发光波长为 488 nm，发射光波长 620 nm。
正常细胞不能着色，焦亡细胞呈红色荧光。
荧光强度强，焦亡细胞比例高。
常见问题分析：
比色法焦亡活性检测方法常见的问题主要为测得的 OD 值偏低，颜色变化不明显，无法显示与对照组细胞的差异，其可能的原因主要集中在以下几个方面：
1. 样品上样量不够：本方法检测需要的细胞数量须在 3×106 以上，或者新鲜组织 50mg 以上，每次反应的蛋白量需要在 100ug 以上。如果量不够，请增加细胞或组织的量。
2. 样本不新鲜：使用新鲜的细胞或组织样本。
3. 样品裂解不够充分：细胞或组织需要进行充分裂解，可以加入适当的蛋白酶抑制剂混合物裂解，裂解后应无明显大量的沉淀，以保证有效获得蛋白。
4. 样品中激活的焦亡水平偏低：首先确认模型的焦亡现象是否明显，以及根据文献和其他验证方法确认该样本是否激活焦亡。
5. 检测时间点的选择是否合适：不论哪种通路的焦亡，需要在焦亡被有效激活并达到相应活化程度后的一定时间范围内检测，过早或过晚均不合适。
6. 不适合本方法检测：某些焦亡诱导剂诱导的焦亡可能是非依赖于该试剂盒检测指标活化的机制，此种情况时利用本试剂盒检测焦亡无明显变化，需要考虑焦亡机制的其他通路。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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