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线粒体膜蛋白提取试剂盒
价格：￥ 50T/900元；100T/1600元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:42:57
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详细内容
线粒体膜蛋白提取试剂盒
产品货号：XY9-3158
产品规格及价格：50T/900元；100T/1600元
产品简介：
线粒体膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种动物原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取线粒体膜蛋白。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解线粒体膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
产品应用：
WB,IP 等
产品特点：
1、 使用方便。
2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
使用方法：
使用注意事项：
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.使用标准Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是线粒体膜蛋白回收率可能会下降。
5.用新鲜的细胞/组织样本，也可以用冻存的细胞/组织样本，但是线粒体膜蛋白回收率会下降。
6.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
7.提取液C在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
8.膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
9.膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量
细胞样本：
1. 提取液准备：
每 200 µl 冷的蛋白提取液 C 中加入 1 µl 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每 200 µl 冷的试剂 D 中加入 1 µl 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取 2×107 个细胞，在 4℃，500×g 条件下离心 5 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。贴壁细胞胰酶消化或直接刮下进行相应洗涤即可。
3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 加入 400 µl 冷的试剂 A，置 4℃条件下持续轻微振荡 5-15 分钟。用 Dounce 匀浆器充分匀浆 20-30 。
5. 然后在 4℃，500×g 条件下离心 5 分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7. 在 4℃，11000×g 以上条件下离心 20 分钟。弃上清，留沉淀。
8. 在沉淀中加入 200 µl 冷的试剂 B，混匀。
9. 在 4℃，11000×g 以上条件下离心 20 分钟。弃上清，留沉淀。
10. 在沉淀中加入 200 µl 冷的试剂 C，高速涡旋振荡 15 秒，置 4℃条件下持续轻微振荡 15-30 分钟。
11. 在 37℃水浴/气浴 10 分钟。
12. 在 37℃条件下 1000-2000×g 离心 5 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层约为 20-40 µl。
13. 小心吸取上层丢弃，留下下层溶液。
14. 用 50-100 µl 冰冷的膜蛋白溶解液溶解下层，即得线粒体膜蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织样本：
1. 提取液准备：
每 200 µl 冷的蛋白提取液 C 中加入 1 µl 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每 200 µl 冷的试剂 D 中加入 1 µl 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取 100 mg 左右的组织样本，用手术剪刀将组织尽可能剪碎，用 PBS 缓冲液或生理盐水洗涤干净。
3. 加入适量 PBS（或 400 µl 冷的试剂 A），用 Dounce 匀浆器充分匀浆 20-30 次。
4. 然后将匀浆液在 4℃，500×g 条件下离心 5 分钟。
5. 弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6. 将上清在 4℃，1000×g 条件下离心 10 分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 在 4℃，11000×g 以上条件下离心 20 分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入 200 µl 冷的试剂 B，充分混匀。
9. 在 4℃，11000×g 以上条件下离心 20 分钟。弃上清，收集沉淀。
10. 在沉淀中加入 200 µl 冷的试剂 C，高速涡旋混匀 5 秒，置 4℃条件下持续轻微振荡 20-30 分钟。
11. 在 37℃水浴/气浴 10 分钟。
12. 在 37℃下 1000×g 离心 5 分钟，此时溶液分为两层，下层约为 20-40 µl。
13. 小心吸取移除上层，留下下层。
14. 用 50-100 µl 冰冷的膜蛋白溶解液溶解下层，即得线粒体膜蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验
常见问题分析：
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂 A 和试剂 C的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
线粒体膜蛋白丰度较低，在条件允许的情况下，需要尽可能的加大细胞样本的上样量，才能收获足够的膜蛋白。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法，因为试剂 D 中含有干扰 Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用 Bradford 法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作
的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
4.膜蛋白电泳没有条带？
膜蛋白样品通常浓度较低，电泳前一定要进行蛋白定量，以保证电泳是蛋白上样量足够。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超声处理一下，再进行蛋白定量。
蛋白加 Loading buffer 后可以不用煮沸，采用 50℃保温 30 分钟。
蛋白 Loading buffer 中 SDS 终浓度含量可以提高至 3%-10%。
有些样品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上样缓冲液中
一般可以跑出清晰的蛋白条带。
电泳时采用低电压低电流电泳。
膜蛋白丰度通常较低，有条件可以尝试用银染染色。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：线粒体膜,蛋白提取试剂盒,线粒体膜蛋白提取试剂盒
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