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大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒
价格：￥ 50T/900元；100T/1600元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:42:57
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详细内容
大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒
产品货号：XY9-3160
产品规格及价格：50T/900元；100T/1600元
产品简介：
大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒是一种高效的高产膜蛋白提取试剂盒。大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒可以从各种大肠杆菌菌体中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
产品应用：
WB,IP 等
产品特点：
1.使用方便，从大肠杆菌中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
6.本品不含 EDTA，可以用于金属螯合层析等下游应用。
使用方法：
使用注意事项：
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
5.提取液A在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
6.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
1. 提取液制备：
每 500 µl 冷的提取液 A 中加入 5 µl 提取液 B 和 2 µl 蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2. 离心收集菌体，用 PBS 洗菌体 2 次。
3. 按每 100-150 mg 湿重菌体样本加入 500 µl 冷的提取液 A（大约菌体和提取液体积比 1:3-1:5，完全淹没菌体即可），吹打混匀，在 2-8℃振荡 1-2 小时，至菌体裂解完全，菌体沉淀减少。
4. 将菌体提取液在 2-8℃低温下 12000×g 离心 5 分钟，弃沉淀，取上清。
5. 将上清液在 37℃水浴 10 分钟。
6. 在 37℃， 1000×g 离心 3 分钟。
7. 此时液体分为 2 层，小心移除上层溶液，留管底部下层，大约 50µl 液体。
8. 用 50-200 µl 冷的膜蛋白溶解液溶解该下层部分，即得大肠杆菌膜蛋白样品。
9. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析：
1.蛋白浓度低？
膜蛋白丰度较低，需要尽可能加大细胞上样量。处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂 A 的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法，因为试剂 A 中含有干扰 Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用 Bradford 法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
4.膜蛋白电泳没有条带？
膜蛋白样品通常浓度较低，电泳前一定要进行蛋白定量，以保证电泳是蛋白上样量足够。
蛋白样品中含有去垢剂，注意蛋白定量方法的选择，防止不合适的方法导致的蛋白浓度数据异常偏高，从而导致依据错误的蛋白浓度数据上样导致上样量不够。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超声处理一下，再进行蛋白定量。
蛋白加 Loading buffer 后可以不用煮沸，采用 50℃保温 30 分钟。
蛋白 Loading buffer 中 SDS 终浓度含量可以提高至 3%-10%。
有些样品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上样缓冲液中，一般可以跑出清晰的蛋白条带。
电泳时采用低电压低电流电泳。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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