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BCA 蛋白定量试剂盒
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详细内容
BCA 蛋白定量试剂盒
产品货号:XY9-3401
产品规格及价格:250T/390元;500T/580元;1000T/1000元
产品简介:
BCA法蛋白定量试剂盒检测原理是,在碱性条件下,蛋白质将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂相互作用,两分子的BCA螯合一个铜离子,形成紫颜色的络合物,该复合物为水溶性,其在562nm处有强吸光性,在一定浓度范围内,吸光度与蛋白质含量呈良好的线性关系。
通过测定562nm的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。
BCA法是目前实验室应用最广泛的蛋白质浓度测定方法,BCA 法快速灵敏、稳定可靠,对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。
BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中,常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。
本试剂盒采用牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液。
本试剂盒最小检测蛋白量可达0.2µg,检测浓度下限达到10µg/mL。
本试剂盒测定范围为20~2000 µg/ml,在此范围内有较好的线性。如需检测10ug/ml-200ug/ml的低浓度蛋白样品,可以选用微量BCA蛋白定量试剂盒。如需检测BCA法背景值较高而不适合BCA法的样品,
可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
产品应用:
蛋白定量

使用方法:
在低温条件或长期保存导致 BCA 试剂出现沉淀时,可搅拌或 37℃温育使溶解。如发现细菌污染则应丢弃,避免对实验结果造成影响。
试剂配制:
1. BCA 工作液配制:
根据样品数量,按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B(50:1)配制适量 BCA 工作液,充分混匀。例如5ml BCA 试剂 A 加 100µl BCA 试剂 B,混匀,配制成 5.1ml BCA 工作液。
总 BCA 工作液体积=(标准品+待测样品)×每个样品所需要的 BCA 工作液×重复数
2. 蛋白标准工作液配制:
根据样品数量配制相应体积的蛋白标准工作液。将蛋白标准储存液用纯水 5 倍稀释,配成蛋白检测:
96 孔微孔板测定:
1. 标准曲线绘制。
取一块酶标板,按以下表格数据加入试剂:
2. 按上表数据在作好标记的 96 孔板微孔中稀释好蛋白标准品并充分混匀。
3. 样品检测。分别在作好标记的其它待测孔加好 20ul 待测蛋白样品(原液或稀释液)。
4. 在标准曲线孔和待测样品孔分别每孔加入 200ul BCA 工作液。充分混匀。
5. 盖上 96 孔板盖,37℃放置 30 分钟。
6. 在 5 分钟内完成酶标仪检测。
7. 用酶标仪测定 A562,以不含 BSA 的光吸收值(0 号孔)为空白对照。
8. 以蛋白含量(g)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。
9. 根据测得的吸收值,在标准曲线上即可查得待测样品的蛋白含量。
10. 计算蛋白浓度:
以查得的蛋白含量除以样品体积 20l,再乘以样品检测前相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。
比色皿测定
1. 标准曲线绘制。
在比色皿/试管中,按以下表格数据加入试剂:
2. 按上表数据在作好标记的比色皿中稀释好蛋白标准品并充分混匀。
3. 样品检测。分别在作好标记的其它待测比色皿中加好 100ul 待测蛋白样品(原液或稀释液)。
4. 在标准曲线孔和待测样品孔分别每孔加入 2ml BCA 工作液。充分混匀。
5. 37℃放置 30 分钟。
6. 在 5 分钟内完成分光光度计检测。
7. 以不含 BSA 的光吸收值(0 号孔)为空白对照,用分光光度计测定 A562。
8. 以蛋白含量(g)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。
9. 根据测得的吸收值,在标准曲线上即可查得待测样品的蛋白含量。
10. 计算蛋白浓度:
以查得的蛋白含量除以样品体积 100l,再乘以样品检测前相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。
常见问题分析:
1.是否每次测定时都需要做标准曲线?
建议每次测定时都做标准曲线。因为 BCA 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,所以除非精确控制显色反应的时间和温度,否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
2.测定时发现随着浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。
可能的原因是样品中含有严重干扰 BCA 法测定蛋白浓度的物质,请参考详细的 BCA 法的兼容性列表。
3.待测样品一定需要稀释吗?
不一定。对于样本来说,需不需要稀释取决于样本的检测值是否落在标准曲线范围内,如果样本浓度超过试剂盒的最高的检测限,那么样本是需要稀释后检测的。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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