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改良Lowry法蛋白定量试剂盒
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详细内容
改良Lowry法蛋白定量试剂盒
产品货号:XY9-34212
产品规格及价格:500T/360元;1000T/540元
产品简介:
Lowry法蛋白定量试剂盒检测原理是,在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物,Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被复合物蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深蓝色,在一定的条件下,蓝色深度与蛋白的量成正比,可根据750nm的光吸收值大小计算蛋白质的含量。
通过测定750nm的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。
本试剂盒采用牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液。
本试剂盒最小检测蛋白量可达0.2µg,检测浓度下限达到10µg/mL。
本试剂盒测定范围为20~2000 µg/ml,在此范围内有较好的线性。
如需检测Lowry法背景值较高而不适合Lowry法的样品,可以选用BCA或Bradford蛋白定量试剂盒。
可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。
还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
产品应用:
蛋白定量

使用方法:
1.蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白标准配制液后,即获得蛋白标准原液,该原液中含有防腐剂,不影响后续检测,该蛋白标准原液-20℃长期保存。
2.待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中,否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致,有可能导致测定不准确。
3.如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但应考虑根据比色皿的最小检测体积。应按比例适当加大改良 Lowry Reagent 工作液的用量使总体积不小于最小检测体积,样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量会显著减少。
4.建议所以样品(包括标准品)采用三复孔,求平均值。
试剂配制:
1. Folin-Ciocalteu Reagen 工作液配制:
根据样品数量,按 Folin-Ciocalteu Reagent:纯水 =1:1 的比例配制 Folin-Ciocalteu 工作液,充分混匀。
2. Lowry 工作液配制:
临用前,根据样品数量,按 Lowry B1:B2:B3=50:1:1 比例配制改良 Lowry Reagent 工作液,即配即用。
总 Lowry 工作液体积=(标准品+待测样品)×每个样品所需要的 Lowry 工作液×重复数
3. 蛋白标准工作液配制
取 1ml 蛋白标准配制液加入到蛋白标准(BSA)(20mg)中,充分溶解后配制成 20mg/ml 的蛋白标准溶液,配制后可立即使用,溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。
取适量 20mg/ml 蛋白标准,稀释至终浓度为 1500ug/ml 或所需浓度。如取 75ul 20mg/ml 蛋白标准,加入 925ul稀释液,充分混匀,即配制成 1500ug/ml 蛋白标准。
蛋白检测:
1. 将 1500ug/ml 蛋白标准用稀释待测样品的溶液 5 倍梯度稀释,浓度分别为
300µg/ml、60µg/ml、12µg/ml、2.4µg/ml、0µg/ml。
2. 各取 40ul 加到 96 孔板的标准品孔。
3. 加 40µl 待测蛋白样品或稀释液(空白对照)到 96 孔板的样品孔中,如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液不同,应在待测蛋白样本孔中加入 40ul 稀释液;如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液相同,无需在待测蛋白样本孔中加入 40ul 稀释液。
4. 用多通道微量移液器快速将 200µl 配制好的改良 Lowry Reagent 工作液加入至各孔,立即在 96 孔板混匀器上充分混匀或手动轻轻混匀 30s。室温准确孵育 10 分钟。
5. 用多通道微量移液器快速将 20µl 新鲜配制的 Folin-Ciocalteu 工作液加至上述各孔中,立即在 96 孔板混匀器上混匀或手动轻轻混匀 30s。加盖以防止液体挥发,室温准确孵育 30 分钟。
6. 轻轻混匀 96 孔板,酶标仪测定 750nm 处吸光度,
7. 对比标准曲线,求得相应待测样品的蛋白浓度。
常见问题分析:
1.是否每次测定时都需要做标准曲线?
建议每次测定时都做标准曲线。因为 Lowry 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,所以除非精确控制显色反应的时间和温度,否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
2.测定时发现随着浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。
可能的原因是样品中含有严重干扰 Lowry 法测定蛋白浓度的物质。
3.待测样品一定需要稀释吗?
不一定。对于样本来说,需不需要稀释取决于样本的检测值是否落在标准曲线范围内,如果样本浓度超过试剂盒的最高的检测限,那么样本是需要稀释后检测的。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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