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细胞自噬检测试剂盒
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详细内容
细胞自噬检测试剂盒
产品货号:XY9-48132
产品规格及价格:200T/2300元
产品简介:
细胞自噬检测试剂盒是采用M53染色法染色细胞内自噬体的检测试剂盒,该产品可代替传统LC3-GFP法,通过荧光示踪物来选择性检测自噬通路中的各种囊泡包括自噬前体、自噬体和自噬溶酶体,无需转染,就能在荧光显微镜下跟踪活细胞的自噬过程进行分析,或用流式细胞仪进行高通量筛选,甚至能标记原代细胞。并且该产品可以进行自噬通路的动力学分析,为研究者展现自噬体形成和消除之间的动态平衡。
细胞自噬检测试剂盒中的 M53自噬体染色
产品应用:
激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪
产品特点:
1.无需转染,可在活细胞内定量检测细胞自噬情况,可在活细胞内定量检测自噬小泡和监控
活细胞自噬流(自噬体的合成、自噬底物到溶酶体的运输、自噬底物在溶酶体的降解过程);
2.适用于流式细胞检测和显微镜分析;
3.可用于高通量筛选自噬的激活剂和抑制剂;
4.可选择性地对前自噬体、自噬体和自噬性溶酶体进行染色,而对溶酶体染色较少。

使用方法:
1. 预实验很重要。必须要做预实验,在正式实验之前取少量样本优化实验条件,并像正式样本一样认真进行,看实验结果是否可行,实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性,不同样本的实验条件通常差异较大,同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同,为了避免浪费正式样本和试剂,一定要提前预实验优化实验条件。
2. 使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使溶液集中于管底。
3. 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4. 标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化,确定最佳条件。以下方法仅供参考。
5. 染色后立即进行分析。
6. 自噬过程很快,通常被诱导后 8 分钟即可观察到自噬体(autophagosome)形成,2 小时后自噬溶酶体(autolysosome)基本降解消失。
1. 染色工作液配制:
根据样本数量,用检测缓冲液将 M53 荧光染料 10 倍稀释,再用相应的培养基或者 HBSS 缓冲液 50 倍稀释,配制成染色工作液。
2. 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1)将细胞置于培养皿中的盖玻片上,加入合适培养基,使其爬片生长。
2)待细胞生长到合适丰度,吸除培养液,加入适量 37℃预热的含 M53 探针工作液。于生长状态下孵育 30 -120 分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定)。
3)利用新鲜培养基或 PBS 替换上述染色液并在荧光显微镜(含合适滤片)下观察。
2.2 对于悬浮细胞
1)离心,吸除上清。
2)利用 37℃预热的探针工作液重悬细胞,于生长状态下孵育 30 -120 分钟(具体时间需根据细胞类型而定)。
3)离心,吸除染色液,加入新鲜培养液或 PBS 重悬细胞。
4)置于荧光镜下观察或流式检测。
3. 观察结果:
在荧光显微镜(含合适滤片)/酶标仪/流式细胞仪下观察细胞。
最大激发/发射波长为 576nm / 590 nm。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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