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植物内质网蛋白提取试剂盒(低速离心法)
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详细内容
植物内质网蛋白提取试剂盒(低速离心法)
产品货号:XY9-315423
产品规格及价格:50T/1100元;100T/1900元
产品简介:
内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统,膜片间的隙状空间称为池,通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路,另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关,并且还具有运输蛋白质的功能。
传统的内质网蛋白提取方法需要采用较高的离心力或者采用密度梯度离心,对实验室离心机设备要求较高,对实验的操作细致程度要求较高。如果实验室没有能达到50000×g以上的离心力的设备,则没法进行提取。
内质网蛋白提取试剂盒(低速离心法)只需要达到20000×g以内的离心力即可提取内质网蛋白,一般的常规台式离心机均可以满足使用要求。
内质网蛋白提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网蛋白的提取。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
产品应用:
WB,IP 等
产品特点:
1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便,不需要大型离心机设备。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.总蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种独立的蛋白酶抑制剂 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法:
使用注意事项:
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2.蛋白酶抑制剂在 2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或 37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.使用Dounce匀浆器匀浆,如果没有Dounce匀浆器,也可用普通玻璃匀浆器匀浆,但是内质网蛋白回收率会下降。
1. 提取液制备:
每 200 µl 冷的蛋白提取液 C 中加入 2 µl 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的 200-500 mg 植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎,加入 1ml 提取液 A 后用匀浆机充分匀浆或者用匀浆器充分匀浆。
3. 将匀浆用 100 µm 细胞筛过滤。
4. 将滤液在 200×g 条件下离心 3 分钟,弃沉淀,收集上清。
5. 在 500×g 条件下离心 5 分钟,弃沉淀,收集上清。
6. 在 1000×g 条件下离心 10 分钟,弃沉淀,收集上清。
7. 将上清 12000-16000×g 力离心 10 分钟。弃沉淀,留上清。
8. 在上清中加入 250 µl 试剂 B,充分混匀。
9. 置 2-8℃冰箱静置过夜。
10. 在 4℃条件下,10000×g 离心 20-45 分钟。
11. 小心移除上清,收集沉淀。
12. 在沉淀中加入 50-200 µl 蛋白提取液 C,充分混匀。
13. 在 4℃条件下振荡 20-30 分钟。
14. 在 4℃条件下,12000-16000×g 离心 10 分钟。收集上清。
15. 即得到内质网蛋白样品,置冰箱备用或直接用于下游实验
常见问题分析:
1.蛋白浓度低?
处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂 C 的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白?
建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法,因为试剂 C 中含有干扰 Bradford 法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用 Bradford 法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗?
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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