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甲醛固定组织蛋白提取试剂盒
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详细内容
甲醛固定组织蛋白提取试剂盒
产品货号:XY9-3165
产品规格及价格:50T/700元;100T/1100元
产品简介:
甲醛固定组织蛋白提取试剂盒适用于从各种经甲醛固定的组织样本中提取总蛋白,提取过程简单方便,提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳,如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用贝博其他货号的试剂盒。也可以将样品除盐后再用于2D电泳,用脱盐柱脱盐处理
可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。
产品应用:
WB,IP 等

使用方法:
使用注意事项:
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2.注意低丰度蛋白的检测方法。
3.离心机转速有相对离心力(RCF,×g)和每分钟转速(RPM,r/min)两种表示方式,有些离心机设置有RPM和×g显示切换,但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算:g=r×1.118×10-5×rpm2(r为有效离心半径,即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度,单位为厘米)例如:转速为3000 rpm,有效离心半径为10 cm,则相对离心力(RCF,×g)为=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
1. 提取液制备:
每 500 µl 蛋白提取液中加入 5 µl 蛋白提取液 B,混匀后备用。
2. 将组织样品用手术剪刀剪碎,每 100 mg 样本中加入 500 µl 蛋白提取液,涡旋振荡 10 秒。
3. 在恒温器(Heat Block)或水浴锅中 100℃保温 20 分钟。
4. 涡旋振荡 10 秒混匀。
5. 在恒温器(Heat Block)或水浴锅中 60℃保温 1-2 小时。
6. 涡旋振荡 10 秒混匀。
7. 在 12000×g 条件下离心 15 分钟。
8. 将上清吸入另一干净离心管,即可得到总蛋白。
9. 将上述蛋白提取物定量后分装保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析:
1.蛋白浓度低?
固定组织的蛋白质回收率在 30%左右。
需要加大组织上样量,调整提取液用量来调整蛋白浓度。
2.WB 实验无条带?
固定组织的蛋白质回收率在 30%左右。低丰度蛋白通常较难检出。
甲醛固定的蛋白质末端基团与甲醛之间形成交联链,各种氨基,亚氨基及酰氨基,肽,胍基,羟基,SH 和芳香环等都会参与甲醛固定蛋白质的基团反应,在这个过程中,绝大部分常规的暴露抗原决定基团遭到破坏,从甲醛固定样本回收的蛋白质做 WB 成功的概率较低,选用抗体说明书上同时可以做 WB 和 IHC 的抗体。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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