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内体提取试剂盒(组织)-低速离心法
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详细内容
内体提取试剂盒(组织)-低速离心法
产品货号:XY9-36714
产品规格及价格:50T/900元;100T/1600元
产品简介:
细胞内体是真核细胞内的一种膜包裹的细胞器,它在细胞的物质转运、信号传导以及病原体感染等多个生物学过程中发挥着关键作用。
成熟的内体直径大约500 nm左右,通常分为早期胞内体(Early Endosome),晚期胞内体(Late Endosome)和循环胞内体(Recycling Endosome)。主要特征是酸性的、不含溶酶体酶的小囊泡。
内体提取试剂盒可用于各种动物组织样本的内体的提取分离。
传统的内体提取方法需要采用较高的离心力或者采用密度梯度离心,对实验室离心机设备要求较高,对实验的操作细致程度要求较高。如果实验室没有能达到100000×g以上的离心力的设备,则没法进行提取。® BBproExtra® 内体提取试剂盒(低速离心法)只需要达到20000×g以内的离心力即可提取内体,一般的常规台式离心机均可以满足使用要求。
低速离心法的内体提取试剂盒的纯度低于高速离心法的,有高速离心条件的实验室建议使用高速离心试剂盒

使用方法:
1. 预实验很重要。必须要做预实验,在正式实验之前取少量样本优化实验条件,并像正式样本一样认真进行,看实验结果是否可行,实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性,不同样本的实验条件通常差异较大,同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同,为了避免浪费正式样本和试剂,一定要提前预实验优化实验条件。
2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
3. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4. 实验中所有液体以及器具均应该用 DEPC 处理。用 0.1%的 DEPC 处理 12 小时然后高压。
5. 下游用于蛋白质类实验的话可以不用 DEPC 处理。
6. 细胞采用新鲜收集的,或者收集后立即置于-80℃保存的样本。
1. 取 50-100 mg 左右组织样本 。用冷 PBS 洗涤干净。
2. 加入 1 ml 冷的试剂 A,置冰上 10 分钟。
3. 用 Dounce 匀浆器匀浆 20-30 下。
4. 将匀浆液在 4℃,1000×g 力条件下离心 5 分钟。弃沉淀,收集上清。
5. 将上清在 4℃,6000×g 力条件下离心 10 分钟,弃沉淀,收集上清。
6. 将上清在 4℃,10000×g 力条件下离心 10 分钟,弃沉淀,收集上清。
7. 将上清在 4℃,20000×g 力条件下离心 10 分钟,弃沉淀,收集上清。
8. 在上清中加入 250 µl 试剂 B,充分混匀。
9. 置 2-8℃冰箱静置过夜。
10. 在 4℃条件下,10000×g 离心 20-45 分钟。
11. 小心移除上清,收集沉淀。
12. 沉淀用适量保存缓冲液重悬。
13. 即得到内体样品,置冰箱-80℃冻存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析:
1. 如何鉴定胞内体?
可以用 Western blot 方法检测内体 Marker(如 Rab5、Rab7 等早期/晚期内体 Marker)或电镜形态观察。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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