人抗狂犬病毒抗体（anti-RV）elisa试剂盒实验原理：

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗狂犬病毒抗体（anti-RV）水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入抗狂犬病毒抗体（anti-RV），再与HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物， 经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗狂犬病毒抗体（anti-RV）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗狂犬病毒抗体（anti-RV）浓度。

人抗狂犬病毒抗体（anti-RV）elisa试剂盒操作步骤：

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

120 IU/L 5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液

60 IU/L 4 号标准品 150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

30 IU/L 3 号标准品 150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

15 IU/L 2 号标准品 150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

7.5 IU/L 1 号标准品 150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，

然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。

11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

原创作者：上海双赢生物科技有限公司