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仓鼠HMG-CoA还原酶(HMGR)elisa试剂盒操作步骤

发布时间:2015/5/13 22:50:09关注度:3549

仓鼠HMG-CoA还原酶(HMGR)elisa试剂盒操作步骤:

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

16U/L 5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液

8U/L 4 号标准品 150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

4U/L 3 号标准品 150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

2U/L 2 号标准品 150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

1U/L 1 号标准品 150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,

然后再加待测样品10µl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此

重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

7. 温育:操作同 3。

8. 洗涤:操作同 5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10 分钟.

10.终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。

11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

仓鼠HMG-CoA还原酶(HMGR)elisa试剂盒实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中仓鼠HMG-CoA还原酶(HMGR)水平。用纯化的仓鼠 HMG-CoA还原酶(HMGR)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 HMG-CoA还原酶(HMGR),再与HRP标记的HMG-CoA还原酶(HMGR)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HMG-CoA还原酶(HMGR)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中仓鼠 HMG-CoA还原酶(HMGR)活性浓度。

原创作者:上海双赢生物科技有限公司


关键字:elisa试剂盒


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