一、双抗体夹心法原理：
ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。以检测HbsAg为例。
二、双抗体夹心法材料：
酶标抗体(HRP-抗HBs-IgG)、抗HBs-IgG、待检血清
包被液 pH9.5 0.05 mol/L CB
稀释液 pH7.4 0.02 mol/L Tris-HCl缓冲液
底物液 0.1 mol/L Na2HPO4(Na2HPO4·12H2O 35.8 g/L)5.14 ml，0.05 mol/L枸橼酸(10.5g/L)4.86 ml混匀，加入邻苯二胺(OPD)4 mg，置棕色小瓶中，临用时加30% H2O2 4.0μl，混匀。
终止液 2 mol/L H2SO4
温箱、酶标反应板、酶标分光光度计
三、双抗体夹心方法:
(1). 包被 取包被液适当稀释的抗HBS-Ig 0.1 ml，加到聚苯乙烯反应板各孔中。加盖，4℃ 24h。次日用洗涤液充分洗涤3次，甩干。
(2). 各孔内加不同稀释倍数的待检血清0.1 ml，同时加阳性和阴性对照血清，置43℃温箱60 min，移去液体。同前法洗涤3次，甩干。
(3). 各孔内加稀释HRP-抗HBs-IgG 0.1 ml，置43℃温箱60 min。移去液体，同前法洗3次，甩干。
(4). 各孔加底物液0.1 ml，置黑暗处20 min。
(5). 各孔内加2 mol/L H2SO4 0.05 ml，终止反应。
四、检测结果:
(1). 目测法 阳性孔呈桔黄色，阴性孔无色或极浅黄色。
(2). 比色法 用酶标分光光度计测A492nm，计算P/N值(为待测血清A492nm和阴性对照A492nm的比值)。如P/N2.1，结果为阳性，否则为阴性。
elisa简便、敏感、特异。并酶标记抗体试剂制备容易、稳定、有效期长、因此推广很快，ELISA双抗体夹心法，但仅适用于二价或二价以上的大分子抗原的检测。

原创作者：上海双赢生物科技有限公司