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大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒实验原理

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上传时间：2016/11/29 13:31:40

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大鼠血管内皮细胞生长因子（VEGF）ELISA试剂盒实验原理：
用纯化的MT抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的MT抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的MT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，余孔分别加标准品或待测样品100 ，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37 温育2小时。为保证实验结果有效
性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2、弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100 （临用前配制），酶标板加上覆膜，37 温育1小时。
3、弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400 /每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4、每孔加检测溶液B工作液（临用前配制）100 ，加上覆膜，37 温育1小时。
5、弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。
6、每孔加底物溶液90 ，酶标板加上覆膜37 避光显色（反应时间控制在15-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。
7、每孔加终止溶液50 ，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
8、立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（OD值）。