人尿道上皮细胞操作要点_技术交流_技术文章

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内wan全解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

7)．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；

8)．所使用的盖玻片应该为you质玻璃制造，并经过铬酸洗液处理；

9)．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

10)．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

11)．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

肺炎克雷伯氏菌催娩亚种 Klebsiella pneumoniae subsp. okatacy

嗜酸乳酸菌 Lactobacillus acidophilus

保加利亚乳杆菌 Lactobacillus bulgaricus

干酪乳杆菌 Lactobacillus casei

弯曲乳杆菌 Lactobacillus curvatus

植物乳杆菌 Lactobacillus plantarum

大肠杆菌 Escherichia coli

普通变形杆菌 Proteus vulgaris

大肠杆菌 Escherichia coli

醋酸钙不动杆菌 Acinetobacter calcoaceticus

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