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技术文章
全血基因组 DNA 提取试剂盒说明书
点击次数：2715 发布时间：2025/2/8 14:49:12
全血基因组DNA 提取试剂盒
规格：50T/100T
保存：常温保存，复检期一年。（注：RNaseA、蛋白酶K以附件形式发货，-20℃保存） 试剂盒内容：
试剂盒组成 50T100T 保存
RNaseA 100μL100μL×2-20℃
蛋白酶K 1mL1mL×2 -20℃
红细胞裂解液 60mL120mL RT
溶液A：白细胞裂解液 25mL50mL RT
溶液B：蛋白沉淀液 25mL50mL RT
漂洗液 15mL15mL×2 RT
洗脱液 10mL20mL RT
DNA吸附柱 50套100套 RT
说明书 1份1份-
注意：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。需自备无水乙醇（每瓶需要单独加入45mL无水乙醇）。
产品简介：
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取全血基因组DNA。离心 吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋 白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的 基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤（仅供参考）：
1、 样品的处理（本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的100-500μL血液样品）：
a. 在血液中加入2倍体积的红细胞裂解液，充分颠倒混匀，12000 rpm离心1min，小心吸去上清，沉淀 为白色或淡红色，如果裂解不，可重复上述步骤一次。
b. 如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量为5-20μL，不需要再用红细胞裂解液处理，直接加500μL溶液A，振荡至混匀。
2、 向沉淀中加500μL溶液A，振荡或者用移液器吹打至混匀，65℃水浴10min，期间可颠倒离心管 混匀数次，直至溶液较为清澈看不见明显细胞为止。
3、 待离心管降至室温后向液体中加入2μLRNaseA、20μL蛋白酶K，充分颠倒混匀，室温放置10min。
4、 加入500μL溶液B，充分颠倒混匀，此时会出现白色沉淀，65℃水浴5min，4℃, 12000rpm离心5min， 小心吸取下层液体（不要吸到上层或漂浮不溶物），转移到干净离心管中，若还有沉淀物，可再次离心。
5、 加入0.7倍体积无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液 和絮状沉淀都加入吸附柱中。
6、4℃, 12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
7、 向吸附柱中加入600μL漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），4℃, 12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8、 向吸附柱中加入600μL漂洗液，4℃, 12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
9、4℃, 12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的 漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
10、 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-100μL经65℃水浴预热的洗脱液，室 温放置5min，12000rpm离心2min。
11、 离心所得洗脱液可再加入吸附柱中，12000rpm离心2min，即可得到高质量的基因组DNA。
注意事项：
1、本试剂盒置于室温（15-25℃)干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。
2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如欲制备大分子量血液基因组DNA，可优 先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝，因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增 时，有PCR扩增抑制现象。
3、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。
5、绝大多数哺乳动物全血中的红细胞无核，故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞，以 免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞 为有核细胞，因此处理量减少为5-20μL，不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
6、洗脱缓冲液的体积不少于50μL，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响， 若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右（可用NaOH将水的pH值调至此范围），pH值低于7.0会 降低洗脱效率。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
