间接ELISA实验中，标本的处理过程有哪些注意事项？

间接 ELISA 实验中，标本的处理过程有诸多注意事项，具体如下：

标本采集

避免溶血：红细胞溶解会释放出具有过氧化物酶活性的物质，在以 HRP 为标记的 ELISA 测定中，可能会增加非特异性显色，影响结果准确性，因此采集血液标本时要注意操作规范，避免溶血。

选择合适的抗凝剂（针对血浆标本）：若使用血浆标本，需用合适的抗凝剂，如 EDTA 抗凝管采集，且 30 分钟内 4℃离心分离。需注意肝素抗凝剂可能干扰检测，具体要参照试剂盒要求选择。

防止细菌污染：细菌菌体中可能含有内源性 HRP，会产生假阳性反应，所以标本采集过程要严格无菌操作。

标本分离

血清分离：采集后室温静置 1 小时，再于 4℃、2500rpm 离心 10 分钟取上清。血液不宜置冰箱（4℃）中凝固，否则会使大部分 IgM 和少量 IgG 丧失活性。

其他标本分离：细胞培养上清可在 1500rpm 离心 10 分钟去除细胞碎片；尿液、脑脊液等可 10000×g 离心 2 分钟，去除沉淀物后检测。

标本保存与冻存

短期保存：对于当天进行检测的标本，可储存在 4℃备用。一般来说，血清标本在 2-8℃可保存 48 小时。

长期保存：如需长期保存，应将标本及时分装后放在 - 20℃或 - 80℃条件下保存，避免反复冻融，因为反复冻融会使抗体效价跌落。标本 - 20℃可保存 1 个月，-80℃可保存 6 个月。

标本稀释

选择合适的稀释液：可用含保护性封阻剂（如吐温 - 20）或称湿润剂的缓冲液来稀释被检血清或血浆标本，也可加入一些蛋白质，如 1% 牛血清白蛋白等来稀释。

确定合适的稀释度：可通过预实验确定合适的稀释倍数，对于一般病原微生物所引起的传染病的血清学诊断，以 1：200 稀释度测定比较适当，但具体还需根据实际情况摸索。

其他注意事项

混匀标本：冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀，宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。

处理混浊或有沉淀的标本：混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。

原创作者：上海笃玛生物科技有限公司