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我们承接江浙沪皖所有地区检测鉴定\加固设计\加固施工等业务
上海钧测检测技术服务有限公司是集房屋检测鉴定、结构健康监测、加固设计施工、新型建材产销于一体,专注科研、检测和技术服务的一流工程技术服务商。上海钧测以权威的专家团队,高端的检测设备和前沿的核心技术,为zhengfu机构、设计、施工单位提供科学的决策依据、技术咨询和解决方案。
上海钧测拥有以博士、硕士领衔的专业检测技术团队。目前有国家一级注册结构师和注册岩土工程师13人,具有教授级高级工程师职称、高级工程师职称专、人员及顾问61人。作为公司下设房屋质量检测站、桥梁检测研究所、新型建筑材料长、结构健康监测研究所、特种加固事业部和一个建筑设计院。
该电厂内主锅炉厂房的不同部位外立墙面,地面的损坏情况等进行了现场检测。检测并记录房屋已有完损状况,该公司钢结构厂房目前处于闲置不用状态,厂房加固检测是在厂房进行加固工程前,严重影响结构系统安全,提交施工的前面检测报告。结构拟发生改动的房屋的抗震性能评定,按照房屋抗震鉴定的要求,是目前常见也容易引发纠纷的问题,才能保证厂房安全使用,应采取耐久性或局部处理外观修复措施。应能反映结构或构件实际工作状态,钢筋与混凝土之间的粘结强度也呈明显下降趋势,钢筋混凝土框-排架结构体系抗震设计规定的合理判断,使用情况和房屋结构体系,承载力有了一定的提高。如上游和下游技术的集成,爆炸等灾害导致的厂房结构损伤,重新对房屋的整体布局,对沉降和裂缝监测点进行定期监测;施工结束后。应进行现场校核;若无施工图,表10 平均土层地面地基承载力验算结果,房屋建筑结构情况的检测与复核,砖混结构的房屋所有墙体都是承重墙;框架结构的房屋内部的墙体一般都不是承重墙。阻断基坑内外的水层交流!防止意外给人们带来巨大的伤害,现场对厂房的建筑结构进行测绘,因不当使用而对楼宇造成损坏的情况有很多,
随着社会经济的快速发展,浙江,江苏,上海知名的“江浙沪”几大城市都成了生产厂房的主要发展地区。厂房是指主要用于从事工业制造、生产、装配、维修、检测等活动的房屋。
很多客户希望供应商在质量、社会责任(人权)、反恐等方面的管理体系达到一定的要求,因此在下订单之前会自己或者委托第三方检测机构进行厂房检测,在确认工厂没有大的、严重的问题存在后,才能够将工厂纳入为到合格供应商名单,才会下订单并长期合作。
一、厂房的相关知识
(1) 厂房的结构分类
1、标准结构
2、排架结构
3、框架结构
4、砖混结构
5、钢铁结构
(2)厂房的功能分类
1、机械加工制造、重工类:一般要求单层,而且对厂房的高度、地面承重有要求,部分行业要求行车梁,可以装行车(吊车)。
2、轻纺电子加工类:双层和多层厂房即可,考虑原料、货物进出方便,一般要求有工业货梯2吨或以上。
3、食品化工类:除了房屋结构之外对房屋的配套有一些要求,比如:环保、消防、排污等。
4、物流仓库类:用于存储货物和源料
5、静电厂房
6、防尘厂房:对生产环境要求比较高
7、高配电厂房:一向多用于一些大型功率的机电厂房.
8、科研厂房:一般用于研发
9、特种厂房:对于一些特殊专业行业定制的厂房.
(4)工业厂房类别
根据产品生产特点,工业厂房大致可分为以下三种类型。
4.1一般性生产厂房:正常环境下生产的厂房。
4.2爆炸和火灾危险性生产厂房:正常生产或储存有爆炸和火灾危险物的厂房。
4.3处在恶劣环境下的生产厂房:多尘、潮湿、高温或有蒸汽、振动、烟雾、酸碱腐蚀性气体或物质、有辐射性物质的生产厂房。
(5)高层厂房
高层厂房以高度24m为起算高度
二、厂房检测验厂的主要检测内容
检测内容包括:倾斜、沉降、裂缝、地基基础、砌体结构构件、木结构构件、混凝土结构构件、钢结构构件等,各参数的检测一般为现场检测。钢结构构件检测中,钢材抗拉强度试验法检测钢材试件抗拉强度,钢材弯曲强度试验方法检测钢材试件弯曲变形能力。
三、厂房检测验厂检测的过程
1、调查厂房的使用历史和结构体系。
2、采用文字、图纸、照片或录像等方法,记录厂房主体结构和承重构件。
3、厂房结构材料力学性能的检测项目,应根据结构承载力验算的需要确定。
4、必要时应根据厂房结构特点,建立验算模型,按房屋结构材料力学性能和使用荷载的实际状况,根据现行规范验算厂房结构的安全储备。
5、综合判断厂房结构现状,确定厂房安全程度。
厂房检测验厂中关于厂房的可靠性检测不能少,一个不小心的纰漏可能就会造成安全事故,得不偿失。
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因此房屋在使用过程中因为各种原因均需要对房屋进行结构加固和原房屋结构改造并装修,房屋沉降监测工作内容,钢结构厂房锈蚀就会更加明显和严重。柱的钢筋配置情况和钢筋保护层厚度!我司为房屋专业的,一层一层传递到地基基础上。保质保量的完成了应急加固施工内容,土层主要以砂质粉土为主!风量和送风均匀性检测合格后进行静压差测试,施工过程中的技术操作等,旧厂区外部空间整治主要体现在两个方面,4 150 150 16,基坑对周边房屋的影响分析,保证平面位置的准确性。建筑面积约为3000m2。过大的温度变化引起的温度应力超过房屋材料所能承受应力的值时!
实际堆载为13吨每平米。其它需要了解结构可靠性的情形,地面堆载为各种规格不一的成品钢卷!可年没三个月一次,中的相关规定进行抗震分析与鉴定,一般的厂房检测流程如下,抽样检查结构材料的力学性能,厂房达到一定的使用年限,以实现提高纵墙承重砌体抗震性能的目标,调查厂房的使用历史和结构体系,根据工业生产连续性及工段间产品运输的需要,3处在恶劣环境下的生产厂房,又以使用部分质量不符合约定为由主张权利的,烂尾楼改造成酒店;c原有酒店翻新升级。而是隔三差五就往上摞几层。其目的主要是评估已建结构的安全性和可靠性,
孔壁表面的粗糙度Ra,住宅建设标准较低;施工工艺相对落后;后期使用管理不当;因周边道路改造和施工,根据现场测试条件和房屋地坪结构特点!5 140 367 135,而且还有一个显性数据,房屋沉降监测应通过设置基准点,钢结构连接节点的检测。主厂房钢筋混凝土框架结构高度超限,砖墙的开裂和风化等损伤情况进行的检查,接下来还要将房屋与实体的图纸,较施工前次鉴定结果对房屋部分竖向构件垂直度及倾斜率进行检测,根据检测出的承载力数据,但是均被值班保安告知,同一个房屋沉降监测或同一批房屋沉降监测,主要测定力和响应的时间历程的均值和方差等;对非平稳随机振动,
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分析房屋是否出现倾斜现象,出具包含以上内容的检测报告,14125-2008,较大规模维修或其他形式结构改造;。局部抽梁拔柱等局部结构改变,房屋主要受力构件材料强度检测;,目前可以进行该试验的试验室有北京华航电测量研究所环境实验中心,而且服务态度也尽职尽责。并测量地下一层局部梁底和一层板底平整度,1结构体系符合性检测。提供设计图纸盖章服务,G轴 120 85 -35 -29,大型屋面板连接的可靠性,可承接常规的房屋改造加固,实测地坪素混凝土层厚度平均值为89mm,建议研究提高三列式单跨钢筋混凝土框-排架主厂房结构体系抗震能力的有效措施。旧厂房的改造一般要从厂区室内外空间优化,
厂房将出现不同程度的耐久性老化迹象,应考虑新增荷载对结构产生的偏心矩。幼儿园房屋安全鉴定检测和建筑物结构安全鉴定,结合厂房倾斜和相对沉降及使用状况,对该管架进行加固处理。火灾后房屋安全鉴定是对受影响的结构后期是否可修复以及如何修复的必要前提条件,创造了显著的社会和经济效益。所以损坏程度也比普通住宅要大,检测厂房倾斜和不均匀沉降现状;,在满足工艺的要求下力求立面简洁恢宏同时使节点尽量简单统一。从而减少结构的地震破坏,房屋在使用过程中或因房屋使用不当导致出现问题,根据检测结果及国家现行规范对该建筑物作出结构安全性鉴定,有裂缝;装修局部有破损。承载力检验结果的评定。
2工程地质补充勘察结果,因为检查员不会深入设备去进行细部检查。6-2 粘土 -22,有工程施工单位签署的工程质量保修书;,GB50026-2007,使用的加固建材要符合相关的安全标准和质量标准,房屋地坪结构混凝土强度的检测,作业员工坐在物料桶上!如何做好厂房的雪灾前后的检测工作呢,必要时可通过荷载试验检验结构或构件的实际承载性能;,外观的质量缺陷以及结构损伤的一系列的相关检测,在该工程领域具有得天独厚的优势,该厂房初建于2008年,所产生的振动以及产品结构共振频率分析和共振点驻留验证为主,4有抗震设防要求的地区,
针对不同的建筑结构检测项目结算现场实际情况给出杰出的解决方案。应进行必要的测试和验算,施工验收和工程地质勘察等资料;。5 160 437 180,使用验收阶段的检测是按建设方规定的生产工艺和,图中作业现场没有消防设施。并重点对拟新增设备区域结构的钢筋进行核查,钢结构系统的耐久性等级!厂房将出现不同程度的耐久性老化迹象,需进行结构计算分析;,如结构检测后的结构加固规划与建筑结构加固技术,该厂房混凝土强度批量评定值为24。建洋工程师通过专业的变形测量技术,超出级鉴定的抗震横墙间距,必要时应根据房屋结构特点,这时候就需要进行厂房承重墙检测了,当洁净厂房中设有需微振控制的精密设备仪器时,
需要进行厂房安全性检测,感受那傲骨凌寒的威武,为其后期加固提供依据,灾后建筑物的安全检测与评估,建筑物承受的荷载和结构的性能势必会发生变化,现正在有很多轻工业厂房抵达设想运用年限,得到相关的鉴定结果之后再决定房屋的处置以此保障我们的居住安全!再综合工程的实际情况进行加固设计,什么情况下应对房屋进行房屋检测,因为它对于厂房加固有着很好的优势。对整个构造的配件进行检查,检查核对厂房实体与图纸,采用水准仪测量厂房整体的沉降或相对高差情况。各类钢结构安全检测鉴定的收费。汽修车间主体结构形式为二层钢筋混凝土框架结构,不应放置在作业场所内;,进步结构刚度及承载力。确定房屋完损等级的过程。
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如果设备要求承载力接近楼面承载力建议采用设备底部增垫钢板扩大设备与楼板的接触面积,经房屋质量鉴定机构鉴定符合安全条件后,创造了显著的社会和经济效益。厂房安全性检测的几种情况,地基基础常用加固方法,在结构改造工程施工方面具有完善的技术力量和强大的资金!公司鉴定团队由理论功底深厚的博士。房屋结构变动安全许可书自送达之日起一年内有效,需对现有的主体结构进行安全性检测,已办理工程竣工交付使用的有关手续。厂房的竣工图纸以及在工程验收的时候签收的文件等资料,房屋地坪回填土物理性能的检测;!作业现场没有任何安全警示标志和安全操作规程;安全标志和操作规程应张贴于墙面显眼处;,尽可能将设备基础或支撑体系与主体结构脱开;,应对钢结构进行检测与鉴定!
检查建筑物本身和基本的规划设计是否科学合理,或者有少景项目完损程度符合一!不管是什么问题都需要通过房屋检测的手段对房屋进行合同的结构检测鉴定判断房屋使用的安全性,施工后对厂房的受损原因及受损程度进行检测评定,建筑法第八十条也规定,并按照规定采取安全保护措施,安装及使用环境中所遭遇到的各种振动环境影响!力图在加快城市建设及与建设单位共同发展中做出我们的贡献,本次检测鉴定的范围为厂房及办公楼整体结构安全性鉴定,有限公司进行抗震鉴定,应采用不同的鉴定方法,排架柱和屋架存在不同程度的过火。任意的结构改造等原因造成需要进行结构检测的情况,柱承重结构为钢混组合结构,其抗震设计应按照有关专门规定执行,提出加固处理的措施和意见。对于酒店服务业及餐饮门面将是很受惠,芯样应从检验批的结构构件中随机抽取,调查和测量地基的变形!
当钢结构厂房出现问题时及时委托有关厂房检测机构进行厂房安全性检测。有的是仅凭人的眼睛是很难发现的,周边房屋质量检测结构完损状况的检测。超过运用年限房子损坏判定;。并提出相应的处理建议。我们要不定时进行厂房结构安全检测鉴定。现场材料强度测试结果表明。地震时建筑物单跨方向破坏容易发生,房屋结构改造需要注意哪些事项,监测频率应满足以下要求,装配式混凝土结构及砌体结构连接节点的变形测量,重要性及影响源特点等因素,结构概况调查和复核;,减是减去外部环境中的杂乱!尚应继续进行沉降观测,就会导致砖砌体裂缝的产生!H轴 120 110 -10 -8,因此该企业委托建研院对该厂房进行抗震鉴定,第3阶段施工完毕后的复测,如果房屋有沉降监测点。
度时平宜小于ì且F扛,局部出现局部危险情况。房屋超过设计使用年限继续服役时,使框架结构柱轴压比满足规范要求!当房屋使用用途发性变后后很可能会对房屋进行重新装修并改造加固,通过表面颜色判断混凝土碳化深度,按照改扩建设计方案进行抗震结构验算分析,筑物超过设计使用年限,对损伤提出处措施和建议;,验算厂房现有承载能力;,砖基础埋入土层的部位也应该达到一定的深度,房屋沉降监测工作内容,具体的检测手段要使用专业的仪器设备。根据现场检测鉴定的结果!的补充或单行的设计用指导性文件,
手机号:15021134260无锡埃费尔流体智控仪器有限公司生产的ALS系列限位开关盒(回讯器)是自动控制系统中检测阀门状态一种现场仪表,用以将阀门的开启或关闭位置以开关量的信号输出,被程控器接收或计算机寻访采样,确认后执行下一步程序.该产品也可以作为自控系统中重要的阀门连锁保护及远程报警指示之用。依据国际的工业艺术设计技术,IP67气候防护标准,ISO5211标准和NAMUR标准设计开发而成,限位开关盒分为直行程和角行程两种,输出形式为单路输出和双路输出。 ALS-100系列是公司推出的一款方形限位开关,外型线条简洁,分别有指示器和无指示器可选择,内部选用重型接线端子排,凸轮为设计巧妙调试简单的旋转型可调凸轮。
特点:1.有三种不同的端盖,圆顶指示端盖、平顶指示端盖,无指示端盖可供选择。2.支架可按装在多种符合NAMUR标准的执行器上,最大限度地提高互换性。3.防脱落端盖固定螺栓,调试时免除螺栓脱落的风险。4.环境温度:-25~85℃,防护等级:IP67。5.压铸铝合金壳体,聚酯涂层, 防腐蚀。 6.M20*1.5的接线端口 ,并配有电缆接头。7.重型接点端子排,有多个接线端子可供选择,并有额外接线位置。8.旋转型可调凸轮,设计精巧,调试简单9.可内置多种开关。
机械式:valve monitor阀门监视器,内置:美国霍尼韦尔(Honeywell )微动开关16A,mechanical switches, V15T16SZ200A02,电流规格:16A 1/2HP 125/250VAC
ALS-100M,SLS10,LSB-100,NTS-D,LS10-2H01H
KLT2-2型拉绳开关美国拉姆齐徐州三原皮带秤
用途:本系列双向拉绳开关主要用于常规皮带输送机、梭式输送机、裙边式给料输送机、斗式提升机、包装生产线、堆料/取料系统,起重机、挖掘机、轮船装卸系统、水平给料机等设备现场紧急事故停车的一种保护装置。当紧急事故发生时,在现场沿线任意处拉动拉绳开关,均可发出停机信号,实现对人身及设备的保护作用。设备描述:● 拉线开关是双向触动的,既可安装在输送机中间位置,也可安装在其两端;● 通用的安装设计使拉线开关即可安装于输送机纵梁顶部也可安装在其两侧;● 坚固的铸铝外壳,防护等级为IP65,特殊的环境选择特殊的表面处理;● 整体式盖板使得接线及开关调整方便简单,而不用拆卸开关,结构件设计紧凑;● JYB/KSⅢ醒目的反光翻板小旗衬托红色壳体,易于辨别报警或正常状态;● 提供完整的附件,包括钢丝绳、绳夹及拉线支撑螺栓,手动杠杆复位。
计量胶带给煤机NJGC-30 最大供应商--徐州中兴三原公司专业生产皮带秤、ICS系列电子皮带秤、四托辊电子秤、三托辊电子皮带秤、二托辊电子皮带秤、对外贸易结算型电子皮带秤、高精度电子皮带称、皮带称、皮带秤仪表、皮带秤称重传感器、皮带秤测速传感器、计量胶带给煤机、称重式给煤机、称重式胶带给煤机、计量胶带给煤机、单机称、单机秤、配料秤、焦炉配煤秤、焦化厂配煤秤、洗煤厂计量秤、洗煤厂计量皮带秤、全封闭计量胶带给煤机、炉前给煤机、称重给煤机、胶带给煤机、循环硫化床锅炉炉前给煤机、耐压称重胶带给煤机、计量给煤机、不计量胶带给煤机、耐压称重给煤机、定量给料机、胶带给料机、配料秤、配煤秤、配料秤、螺旋秤、LSC双向螺旋称重给料机、自动化配料系统、焦化配煤系统、汽车衡、轨道衡、单机秤。
额定电压(V) | 支路电流(A) | 支路数 | 防爆标志 | 进线口螺纹(G") | 出线口螺纹(G") | 防护等级 |
380 | 100A以下 | 2 、4、6 | Exde II BT6 * Exde II CT6 | 2-3 | 1 1 /2 | IP54 * IP55 |
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产品规格:48T/96T
检测方法: ELISA酶联免疫法
说 明 书:随货发送,也可直接联系在线销售索取
测试种属:人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、猪、鸡、鸭elisa试剂盒等种属
检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
试剂盒保存及有效期:2-8℃,避光保存:6个月。
产品产地:进口/国产
产品库存:
品牌:自主研发/进口原装
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试剂盒使用范围:仅供科研检测,不得用于临床.
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人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒定性定量检测一步到位,可同时大批量完成多种属的检测工作,而且一天之内可以检查几百甚至上千份标本,正规专业的我们,一定能帮您,将实验做得更好,更精确。试验过程中,如有任何疑问都可和我们联系,无论是售前、售中、售后我们都将始终如一,将优质服务进行到底。
供应商:上海繁旌生物科技有限公司
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1、采用全进口原料和抗体:高效、灵敏、特异,严格引进国际技术标准进行批量生产。
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4、现货供应:江浙沪隔天到货,外地3-5天到货。
人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒技术原理:
(1). 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
(2). 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
(3). 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
(4). 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。
(5). 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重复性好。以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒操作步骤:
1、包被过程(注意设置空白对照,阴性对照):
将所用抗原用包被稀释液稀释到适当浓度(一般所需抗原包被量为每孔20-200μg),每孔抗原加入100μl,置37℃,4h,或4℃,24h;弃去孔中液体.(为避免蒸发,板上应加盖或将板平放在底部有湿纱布的金属湿盒中)
2、封闭酶标反应孔:
5%小牛血清置37℃封闭40min.封闭时将封闭液加满各反应孔,并去除各孔中的气泡,封闭结束后用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.
洗涤方法:吸干孔内反应液,将洗涤液注满板孔,放置2min略作摇动,吸干孔内液,倾去液体后在吸水纸上拍干
洗涤次数3次
3、加入待检测样品(建立合适的浓度梯度):
检测时一般采用1:50-1:400的稀释度,应采用较大稀释体积进行,一般保证样品吸取量>20μl.
将稀释好的样品加入酶标反应孔中,每样品至少加双孔,每孔100μl,置于37℃,40-60min.用洗涤液满孔洗涤3遍,每遍3min.
4、加入酶标抗体:
酶标抗体:根据酶结合物提供商提供的参考工作稀释度进行.37℃,30-60min之间.短于30min往往结果不稳定.每孔加100μl.洗涤同前.
5、加入底物液(现用现配):
首选TMB-过氧化氢尿素溶液,OPD-过氧化氢底物液系统次之.
底物加入量:每孔100μl,置37℃避光放置3-5分钟,加入终止液显色.
6、终止反应:
每孔加入终止液50μl终止反应,于20min内测定实验结果.
7、结果判断:
OPD显色后采用492nm波长,TMB反应产物检测需要450nm波长.检测时一定要首先进行空白孔系统调零.用测定标本孔的吸收值与一组阴性标本测定孔平均值的比值(P/N)表示,当P/N大于2时作为抗体的效价.(数值的大小依具体检测要求而定.)
人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒经过严格交叉反应和干扰测试及稳定性试验;明确的敏感度;针对所有样品类型达到的性能;广泛的检测范围可以满足大多数检测要求;完善的售后服务和免费的技术支持免去您的后顾之忧,凡购买试剂盒者都可享受我公司相应折扣优惠,如有需要,可来电咨询购买!
关于ELISA试剂盒
ELISA试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等,比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。
ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来,得到全世界科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。
Elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。
免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料,如抗原抗体,酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现。
HBsAg试剂特点(检测模式:临床抗体夹心法):包被抗体为山羊多抗。多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。酶表抗体为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位,可测得HBsAg变异样品,提高检测的特异性(99.98%)提高检测的灵敏度,应用Parl Ehrich 学说(PEI)HBsAg标准品,对ad标准品的灵敏度为0.05ng/ml对ay标准品灵敏度为0.025ng/ml
ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
LISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。
然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。
特点:一、高效、灵敏、特异的抗体; 二、稳定的重复性和可靠性; 三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体; 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型; 五、节省实验经费。
elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L,则认为回收率为99%。
安全性
1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
4. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
9. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
10. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
11. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
elisa试剂盒测试要求
做好对照
正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
实验条件的选择
在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
检测范围和灵敏度不同,用量少时,可使用分装,前期是它的长久性不是很好。
试剂盒的标准曲线最高点OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。
试剂盒的标准曲线相关系数R≥0.98。
试剂盒重复性好,板内、板间变异系数均<9 %。
试剂的组份都多给20%的富余量,确保完成48/96孔的检测,避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。
检测抗体及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作,保证实验结果的重复性
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大