斑马鱼三碘甲状腺原氨酸(T3)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定斑马鱼血清,血浆及相关液体样本中三碘甲状腺原氨酸(T3)的含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼三碘甲状腺原氨酸(T3)水平。用纯化的斑马鱼三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入三碘甲状腺原氨酸(T3)抗原,再与HRP标记的三碘甲状腺原氨酸(T3)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的三碘甲状腺原氨酸(T3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中斑马鱼三碘甲状腺原氨酸(T3)浓度。
试剂盒组成:
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品:27pmol/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2-8℃保存 |
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为18pmol/L,12pmol/L ,6pmol/L,3pmol/L,1.5pmol/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,
在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释
倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值
代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释
倍数,即为样品的实际浓度。
(此图仅供参考)
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围:
1pmol/L -20pmol/L
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月
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●产品技术性能符合GB3983-89、GB/T11024-2001《高低压并联电容器》国家标准及lEC871-1(1987)要求。西安骊创电子科技有限公司是一家集产品研发、制造服务为一体的高科技企业。专业生产高压电容器、电抗器、变压器,电力电容器,高压电阻器等。公司生产设备先进,检测试验设备齐全,科研力量雄厚,拥有强大的研发实力和生产能力,有一支高素质的员工队伍,产品在吸收国内外先进技术的基础上,通过严谨的质量体系管理,结合本公司的特色工艺和工装,在产品开发上不断完善、不断创新,可根据用户的特殊要求设计和生产。产品性能均达到国家和行业标准,营销全国各地,深受用户的好评
公司坚持以人为本,强化管理,诚信经营,走品牌创新之路。电抗器类产品有:高低压空心铁心串联电抗器、限流电抗器、启动电抗器、平波电抗器、三相交流电抗器、中频平波电抗器、输入输出电抗器,滤波器,电阻,制动单元等;变压器类产品有:各类单相及三相干式变压器、 QZB系列自耦变压器、TSB调N线系列变压器、BK系列控制变压器、隔离变压器、中频变压器、整流变压器等、点焊机专用变压器等。电力电容器类产品有:高低压并联电力电容器、滤波电容器、电热电容器、防护电容器、电容式电压互感器、高压测量用标准电容器、电容分压器,高低压电容补偿装置及谐波治理装置、无功功率自动补偿控制器。
TF130热式涡街流量计是在漩涡发生体上,采用Sailsors独自开发的热式流速传感器,对涡街频率进行检测,是目前进的具有宽测量比特长的气体专用热式涡街流量计. TF130热式涡街流量计中采用一体化温度、压力补偿结构.不需要再单独加温度、压力补偿,漩涡发生体采用了硅基微机械加工技术、薄膜成型技术制作的热式流速传感器,实现了100:1的宽量程比.标准配备有LCD显示功能、模拟输出(4-20mA)、脉冲输出、瞬时流量、累积流量;另外还配置了RS-485通讯功能. | |
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3351、3051、1151DP/GP型带远传装置的差压/压力变送器,可避免被测介质直接和变送器的隔离膜片接触,它适用于下面几种情况: 被测介质对变送器头和敏感元件有腐蚀作用时; 需要将高温被测介质与变送器隔离时; 被测介质中有固体悬浮物或高粘度易堵塞变送器头和压力容器时; 被测介质用引压管引出易固化或结晶时; 更换被测介质需要冲洗而不容交混时; 必须保持卫生条件,防止污染时。