人补体7(C7)ELISA试剂盒 检测试剂盒
英文名称:Human Complement 7,C7 ELISA Kit
货 期:现货
主要用途:科研检测
用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。
说明书:人补体7(C7)ELISA试剂盒 说明书 欢迎来电索取产品说明书
提供实验代测服务.您只需将需要检测的种属(Human,Rat,Mouse,Rabbit,Monkey, Pig……)和检测指标(介素类、因子类)及标本数量(48T/96T)通知公司业务员即可。在接到客户标本当日起,现货产品一周内将检测报告交到客户手中!
人补体7(C7)ELISA试剂盒 组成:
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 |
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封板膜 | 2片(48) | 2片(96) |
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密封袋 | 1个 | 1个 |
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酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品 | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
人补体7(C7)ELISA试剂盒 检测试剂盒 提供免费代测服务,一周内出结果,更多Elisa试剂盒保证质量
WRM-52 WRN-52 WRE-52 WRC-52 活动管接头式热电偶(防喷式)活动管接头式热电偶(防喷式)活络管接头式装配热电偶主要应用装配热电偶通常和显示仪表、记录仪表、电子计算机等配套使用。直接测量各种生产过程中的0度-1300度范围内液体、蒸汽和气体介质以及固体表面温度。装配式热电偶特点1、装配简单,更换方便;2、压簧式感温元件,抗振性能好;3、测量范围大;4、机械强度高,耐压性能好。活络管接头式热电偶安装要求对热电偶与热电阻的安装,应注意有利于测温,安全可考及维修方便,而且不影响设备运行和生产操作.要满足以上要求,在选择对热电偶和热电阻的安装部位和插入深度时要注意以下几点: 1、为了使热电偶和热电阻的测量端与被测介质...活络管接头式装配热电偶主要应用装配热电偶通常和显示仪表、记录仪表、电子计算机等配套使用。直接测量各种生产过程中的0度-1300度范围内液体、蒸汽和气体介质以及固体表面温度。装配式热电偶特点1、装配简单,更换方便;2、压簧式感温元件,抗振性能好;3、测量范围大;4、机械强度高,耐压性能好。活络管接头式热电偶安装要求对热电偶与热电阻的安装,应注意有利于测温,安全可考及维修方便,而且不影响设备运行和生产操作.要满足以上要求,在选择对热电偶和热电阻的安装部位和插入深度时要注意以下几点: 1、为了使热电偶和热电阻的测量端与被测介质之间有充分的热交换,应合理选择测点位置,尽量避免在阀门,弯头及管道和设备的附近装设热电偶或热电阻。 2、带有保护套管的热电偶和热电阻有传热和散热损失,为了减少测量误差,热电偶和热电阻应该有足够的插入深度: (1)对于测量管道中心流体温度的热电偶,一般都应将其测量端插入到管道中心处(垂直安装或倾斜安装).如被测流体的管道直径是200毫米,那热电偶或热电阻插入深度应选择100毫米; (2)对于高温高压和高速流体的温度测量(如主蒸汽温度),为了减小保护套对流体的阻力和防止保护套在流体作用下发生断裂,可采取保护管浅插方式或采用热套式热电偶,浅插式的热电偶保护套管,其插入主蒸汽管道的深度应不小于75mm;热套式热电偶的标准插入深度为100mm; (3)假如需要测量是烟道内烟气的温度,尽管烟道直径为4m,热电偶或热电阻插入深度1 m即可; (4)当测量原件插入深度超过1m时,应尽可能垂直安装,或加装支撑架和保护套管。活络管接头式热电偶产品用途:K型热电偶作为一种温度传感器,K型热电偶通常和显示仪表,记录仪表和电子调节器配套使用。K型热电偶可以直接测量各种生产中从0℃到1300℃范围的液体蒸汽和气体介质以及固体的表面温度。K型热电偶通常由感温元件、安装固定装置和接线盒等主要部件组成。活络管接头式热电偶主要技术参数 ○产 品执行标准 IEC751 JB/T8622-1997 JB/T8623-1997 ○常温绝缘电阻 热电阻在环境温度为15~35℃,相对湿度不大于80%,试验电压为10~100V(直流)电极与外套管之间的绝缘电阻≥100MΩ。装配热电偶,铠装热电偶,端面热电偶,压簧固定热电偶,高温热电偶,铂铑热电偶,防腐热电偶,耐磨热电偶,高压热电偶,特殊热电偶,手持式热电偶,微型热电偶,贵金属热电偶,快速热电偶,钨铼热电偶,单芯铠装热电偶等等
人补体7(C7)Elisa试剂盒,现货供应,款到即可发货,快递时间3天左右。
规格:96T/48T
保存条件:2-8℃低温保存库存:现货供应保质期:六个月运输:快递运输(可根据客户要求,选择具体的运输方式,无特殊要求我公司一般为中通或韵达)用途:科研实验等领域科学研究,不得用于临床诊断
本公司的ELISA试剂盒,品质高,灵敏度好,曲线漂亮,无效包退包换,还可提供免费代测服务,各种种属、各种系列ELISA科研实验检测试剂盒,详情可来电咨询我公司销售人员或咨询我公司在线客服QQ。
人补体7(C7)Elisa试剂盒,操作步骤:1.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 2.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用3.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。4.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 5.温育:6.洗涤:
人补体7(C7)Elisa试剂盒,注意事项:1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。
人补体7(C7)Elisa试剂盒,样本收集与前期准备
利用ELISA进行临床检验常见的样本一般包括血液(指血,静脉血),尿,粪便,脑脊液,胸腹水,前列腺液,精液,阴道分泌物等,这些样本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。(一) 临床样本的收集A、血液样本 有些生理因素,如吸烟、进食、运动、情绪波动、妊娠、体位等均可影响血液中某些成分的变化,有些甚至还有昼夜变化。因此血液标本的采集应尽量避免生理因素干扰,以条件一致为宜,如无法避免,应在标本上注明该因素。1.外周血 一般选取左手无名指内侧采血,该部位应无冻疮,炎症,水肿,破损。如该部位不符合要求,以其他手指部位代替。对烧伤病人,可选择皮肤完整处采血。由于部分血液常规检测(如白细胞计数、分类等)受生理因素影响波动过大,比较时宜使条件尽量一致。涉及到体内出、凝血功能的检测项目(如血小板计数,出血时间或凝血时间等)的检测,一定要注意了解患者是否用过抗凝、促凝药物,以便在减少或避免干扰因素的影响。2.静脉血 除涉及各种止血和血栓检测等项目需采用抗凝静脉血血浆外,目前绝大多数检测项目的分析检测可直接采用静脉血的血清。在血清检测项目中,有些(如血糖,血脂等)受饮食及昼夜因素影响较大,一般以清晨空腹血标本为宜;有些在血中衰变较快(血清酶活性测定如ACP活性等),0~4℃贮存活性减弱也不一,这些项目的检测必须及时而快速;有些(如肌酸激酶等)受运动等因素影响较大。抽血时避免溶血的发生也十分重要,尤其涉及血钾,LDH等的测定。
B、尿液样本 同血标本一样,尿液标本受饮食、运动、药物量等因素的影响也较大,特别是饮食的影响,故一般来说晨尿优于随机尿。晨尿是指清晨起床后的次尿标本,较浓缩和酸化,有形成分(如血细胞,上皮细胞,管形)相对集中便于观察。随机尿即随意一次尿,留取方便,但受饮食、运动、药物影响较甚,易于出现假阳性和假阴性结果,如饮食性蛋白尿,饮食性糖尿,维生素C干扰潜血结果等。餐后尿(午餐后2小时收集的患者尿液)适用于尿糖,尿蛋白和尿胆原的检查,此时的尿标本可增加试验敏感性,检出较轻微的病变。12小时尿细胞计数即Addis计数(前晚8时排空膀胱后留取至次日晨8时的所有尿液),因时间较长,细菌易繁殖,须加入防腐剂甲醛。24小时尿(天晨8时排空膀胱后留取至次日晨8时的所有尿液)中化学物质的定量,包括蛋白,糖,尿17-酮、17-羟类固醇,儿茶酚胺,Ca2+等,检测不同的物质,选择不同的防腐剂防腐。清洁中段尿多用于尿细菌培养,要求无菌,冲洗外阴后留取标本。所有尿标本的收集都应足量,最少12 ml,50 ml,定时尿须全部收集,对女性患者应避免阴道分泌物、经血污染尿标本。
C、粪便样本 粪便标本的检测对判断消化系统疾病有重要参考价值。采集时要求用干净的竹签选取含有粘液、脓血等异常病变成分的粪便,对外观无异常的粪便须从表面、深处及粪端多处取材。找寄生虫虫体及作虫卵计数应收集24小时粪便。查痢疾阿米巴滋养体应于排便后立即检查,从有脓血和稀软处取材,保温送检。查日本血吸虫虫卵时应取粘液、脓血部分,孵化毛蚴时至少留取30g粪便,且需尽快处理。检查蛲虫卵须用透明薄膜拭子于晚12时或清晨排便前自肛门周围皱襞处拭取并立即镜检。隐血试验(化学法),试验前3日禁食肉类及含动物血食物并禁服铁剂,维生素C等。所有粪便标本采集后1小时内应检查完毕,以防止有形成分受消化酶及pH的破坏,来不及检测的,应及时用PBS进行缓冲处理,离心去上清保存。
D、脑脊液样本 脑脊液标本采集后立即送检,放置过久将影响检验结果:如细胞变性,破坏,导致计数和分类不准;有些化学物质如葡萄糖等将分解含量减少;细菌发生自溶影响细菌的检出率。脑脊液抽取后一般分装三个无菌管,管作细菌培养,第二管作化学分析和免疫学检查,第三管作一般性状及显微镜检查,三管的顺序不宜颠倒。因标本采集较难,全部送检和检测过程应注意安全。
E、胸腹水样本 与脑脊液标本一样,采集后的标本注意安全,及时送检。一般也分装三管,一管作常规细胞学检查,一管生化检查,一管细菌培养,顺序以与脑脊液相同为宜。
F、前列腺液样本 前列腺液标本由前列腺按摩后采集,液量少时直接滴在载玻片上及时送检,须注意防止标本蒸干,量多时收集在洁净干燥的试管中。若按摩不出前列腺液,可检查按摩后的尿液沉渣。
G、精液样本 精液标本采集前应禁欲3~7天,排净尿液后可用手淫法或其他方法将精液直接排入干净的容器中,保温并及时送检。由于精子生成日间变动较大,一般应检查2~3次(每次间隔1~2周)方可做诊断。
H、阴道分泌物样本
阴道标本采集前24小时应禁止房事、盆浴、阴道检查、阴道灌洗及局部上药等,取材所用器械需清洁。一般用盐水浸湿的棉拭子自阴道深部或阴道穹后部、宫颈管口等处取材,制成生理盐水涂片后观察阴道分泌物标本,经期的女性患者不宜检查阴道分泌物标本。
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Elisa试剂盒现货产品,上海地区免费送货,外地客户(发货方式:快递、 航空 、EMS等),1-3天到货。公司ELISA试剂盒产品免费快递、免费代测,厂价销售。小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA试剂盒公司主打产品:小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Bone morphogenetic protein 4,BMP-4 ELISA试剂盒小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Bone morphogenetic protein receptor 1A,BMPR-1A ELISA试剂盒小鼠碱性磷酸酶(ALP)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse alkaline phosphatase,ALP ELISA试剂盒小鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Angiopoietin 4,ANG-4 ELISA试剂盒小鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,BMPR-Ⅱ ELISA试剂盒小鼠主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse major histocompatibility complex-Ⅲ,MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ ELISA试剂盒小鼠E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse E-Cadherin,E-Cad ELISA试剂盒小鼠CD30分子(CD30)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Cluster of differentiation 30,CD30 ELISA试剂盒小鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse major histocompatibility complex-Ⅱ,MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ ELISA试剂盒小鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA试剂盒小鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse eosinophil chemotactic factor,ECF ELISA试剂盒小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Eotaxin 1 ELISA试剂盒小鼠红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Erythropoietin,EPO ELISA试剂盒小鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse E-Selectin ELISA试剂盒小鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Factor-related Apoptosis,FAS ELISA试剂盒小鼠Slit2 ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Slit2 ELISA试剂盒 小鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse amyloid beta peptide 1-42,Aβ1-42 ELISA试剂盒小鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse 8-Hydroxy-desoxyguanosine,8-OHdG ELISA试剂盒小鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Interleukin 1 receptor antagonist, IL-1ra ELISA试剂盒小鼠降钙素原(PCT)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Procalcitonin,PCT ELISA试剂盒小鼠胰岛素自身抗体(IAA)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse insulin autoantibodies,IAA ELISA试剂盒小鼠抗核膜糖蛋白210抗体(gp210)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Anti-glucoprotein 210,GP210 ELISA试剂盒 小鼠白介素7(IL-7)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒,小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA试剂盒 Mouse Interleukin-7,IL-7 ELISA试剂盒小鼠褪黑素(MT)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Melatonin,MT ELISA试剂盒小鼠载脂蛋白H(Apo-H)ELISA试剂盒 酶联免疫试剂盒, Mouse Apolipoprotein H,Apo-H ELISA试剂盒 小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA试剂盒 规格: 48T/96T 包装: 盒装 保存: 2-8℃ 用途: 科研 种属: 人、小鼠、大鼠等其它动植物 标本: 血清或血浆等其它标本 样品稀释: 48孔配置(3 ml×1瓶) 96孔配置(6 ml×1瓶)
20TAC47BSUC10PN7B25TAC62BSUC10PN7B30TAC62BSUC10PN7B35TAC72BSUC10PN7B40TAC72BSUC10PN7B40TAC90BSUC10PN7B45TAC75BSUC10PN7B45TAC100BSUC10PN7B50TAC100BSUC10PN7B
25TAC62BDBC10PN7A AS2SQ25TAC62BSUC10PN7B AS2SQ30TAC62BDBC10PN7A AS2SQ30TAC62BSUC10PN7B AS2SQ35TAC72BSUC10PN7B AS2SQ40TAC72BSUC10PN7B AS2SQ40TAC90BSUC10PN7B AS2SQ45TAC100BSUC10PN7B AS2SQ45TAC75BSUC10PN7B AS2SQ50TAC100BSUC10PN7B AS2SQ
人粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA试剂盒等相关ELISA试剂盒产品说明书下载地址:http://www.shxysw.net/shxysw-Article/ 注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。 人粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA试剂盒规格:96T/48T 产品保存条件:低温
产品范围:
人,小鼠,大鼠,猪,兔,其它动物细胞因子;细胞凋亡,活性多肽、自身抗体 ,血栓与止血,
骨代谢,肝纤维化,肿瘤,激素内分泌、自身抗体科研ELISA检测试剂盒
提供实验代测服务
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。
说明
1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
标本的采集及保存
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则:
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为300 pg/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml,临用前15分钟内配制。
如配制150 pg/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则:
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
注:
1. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。