HT22-GFP-Puro+ffluc2稳转株
产品名称 | HT22-ffluc2-GFP-Puro 稳转细胞株 |
产品货号 | XY-M1234 |
中文名称 | ffluc2 和 GFP 双标的 HT22 稳转细胞株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转细胞株; (4)稳转细胞株质检(COA)。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液(VGA-0046-100) |
存储条件 | 液氮 |
共享方式 | 公益性共享 |

HT22-GFP-Puro+ffluc2 稳转株概述
HT22 细胞是源自小鼠海马的永生化神经元细胞系,常用于神经生物学、神经毒性、细胞凋亡等研究。
** 稳转株(稳定转染细胞株)** 是通过基因工程手段将外源基因稳定整合到细胞基因组中,使其能够长期表达特定蛋白的细胞群体。
各组件功能与应用
1. GFP(绿色荧光蛋白)
功能:作为报告基因,用于实时可视化观察细胞形态、定位及转染效率。
应用:
荧光显微镜下追踪细胞分布(如神经元突起生长、细胞凋亡过程)。
流式细胞术(FACS)筛选阳性细胞克隆。
体内成像研究(需结合活体荧光成像系统)。
2. Puro(嘌呤霉素抗性基因)
功能:筛选工具,用于富集成功整合外源基因的细胞。
机制:未转入抗性基因的细胞会被嘌呤霉素杀死,存活细胞即为稳定转染株。
应用:稳转株构建过程中的选择性培养,确保外源基因持续表达。
3. ffluc2(萤火虫荧光素酶 2)
功能:生物发光报告基因,需底物荧光素(Luciferin)触发化学反应产生光信号。
优势:
灵敏度高,适用于微量细胞或活体动物体内成像(如肿瘤转移、神经退行性疾病模型)。
信号可定量,通过酶标仪或活体成像系统检测发光强度,反映基因表达水平。
应用场景:
体内外细胞增殖、凋亡、药物疗效的动态监测。
构建荷瘤小鼠模型,追踪肿瘤生长与治疗响应。
稳转株构建流程(示例)
载体构建:将 GFP、Puro 抗性基因和 ffluc2 编码序列克隆至同一质粒载体(如慢病毒载体)。
细胞转染:通过病毒感染(慢病毒 / 逆转录病毒)或化学转染法将载体导入 HT22 细胞。
抗性筛选:添加嘌呤霉素培养 2-3 周,杀死未成功转染的细胞。
单克隆挑选:通过有限稀释法或流式细胞术筛选单克隆细胞,确保外源基因稳定表达。
鉴定验证:
荧光显微镜检测 GFP 表达(绿色荧光)。
luciferin 底物检测 ffluc2 活性(发光信号)。
Western blot 或 PCR 验证目的基因蛋白 / RNA 水平。
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