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试剂盒名称:人ELISA试剂盒—人C肽ELISA试剂盒
检测用所有试剂全部都为进口试剂,适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本,灵敏度极高,多年专业酶免服务,我们保证对所售任何产品一概负责到底,每一份实验结果都真实可靠!各检测项目酶免(ELISA)试剂盒具备,价格优惠,定货及时,送货上门.此外,我公司还提供样本代测服务。
规格:48T/96T
人ELISA试剂盒—人C肽ELISA试剂盒 组织样品前处理:①1g组织切碎后加5倍体积的TBS,用均质器均质(10次)。 组织匀浆5000×g,4℃离心20分钟TBS:50 mmol/L Tris-HCl , pH 7.6, 150 mmol/L NaCl , 蛋白酶抑制剂 [0.1 mmol/L 二异丙基氟磷酸盐 , 0.5 mmol/L 苯甲磺酰氟 , 1 g/mL甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基酮盐酸盐, 1 g/mL抗痛素, 0.1 g/mL亮肽素]②沉淀物悬浮与5倍体积的TBA/蛋白酶抑制剂(含1 mol/L蔗糖),5000×g,4℃离心20分钟。③沉淀物中加入3倍体积的1%Triton X-100/TBS/蛋白酶抑制剂,匀质(10次)。37℃孵育15分钟后,5000×g离心20分钟。④沉淀物和匀质物中加入3倍体积的2%SDS/TBS/蛋白酶抑制剂到。组织匀浆37℃孵育15分钟后,500000×g 25℃离心。⑤沉淀物中加1mL 70%蚁酸到,超声破碎后5000×g 4℃离心⑥收集上清液并用离心浓缩(Speed Vac)干燥。加100μL DMSO并短时超声破碎成悬液。零下80℃储存这个DMSO-蚁酸溶解的改组织溶液直到使用。⑦检测时,依照说明书所写,用试剂盒中的标准稀释液溶解样本。
人ELISA试剂盒—人C肽ELISA试剂盒 操作步骤: 实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。 为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。 4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl,37℃,60分钟。 5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。 7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
人ELISA试剂盒—人C肽ELISA试剂盒 产品订购说明:1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日最新价格为准。 4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、电话等以传真、EMail、短信、电话等形式通知我们。
人C肽Elisa试剂盒,(C-Peptide)Elisa试剂盒 为客户提供来样检测服务,最大限度实验结果的有效性(免费代测)。
盒装规格:96T/48T
kit成分:酶标板,试剂,标准品等—点此免费索取提供Elisa试剂盒说明书!
人C肽Elisa试剂盒,(C-Peptide)Elisa试剂盒 实验误差分为三种:系统误差、随机误差和过失误差。1、系统误差是指一系列测定结果与真值或靶值存在有同一倾向的误差,有明显的规律性,可在一定条件下重复出现,是可以通过质控预防和校正的。2、随机误差又称偶然误差,是一种偶然的、未能预料到的误差,是难以避免和校正的误差。检验工作中随机误差的分布符合正态分布规律。3、过失误差是人为的责任误差。通过加强实验室管理和开展质量控制工作是可以避免的。
人C肽Elisa试剂盒,(C-Peptide)Elisa试剂盒 本公司Elisa试剂盒库存现货,涵盖人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、犬、鸡、马、猴、羊、猪、牛、各类植物等等种属
HumanN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit,人N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸Elisa检测试剂盒鸡肾上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒 Chicken adrenomedullin,ADM ELISA试剂盒IL-20,小鼠白介素-20Elisa试剂盒大鼠白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒Rat Interleukin 1β,IL-1β ELISA试剂盒 兔Elisa试剂盒,兔CollagenaseII Elisa试剂盒,RabbitCollagenaseTypeIIELISA试剂盒Elisa供应,甲啡肽M-enkephA试剂盒linELISA试剂盒,96T/48T小鼠Elisa试剂盒,小鼠FⅨ Elisa试剂盒,MouseFcoagulationfactorⅨ,FⅨELISA试剂盒人Elisa试剂盒,人25OH Elisa试剂盒,Human25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISA试剂盒人Elisa试剂盒,人BLI Elisa试剂盒,Humanβ-Lactamaseinhibitors,BLIELISA试剂盒大鼠Elisa试剂盒,大鼠LF/LTF Elisa试剂盒,RatLactoferrin,LTF/LFELISA试剂盒human Prostaglandin F,PG-F ELISA试剂盒人(PGF)kit说明书,前列腺素FElisa试剂盒人血清素/血清胺Elisa试剂盒,(ST)Elisa试剂盒HumanSerotonin,STELISA试剂盒Rat transforming growth factorsβ2,TGFβ2 ELISA Kit ,大鼠elisa试剂盒,大鼠转化生长因子β2试剂盒,(TGFβ2)Elisa试剂盒人巨噬细胞活化因子Elisa试剂盒,(MAF)Elisa试剂盒Humanmacrophageactivatingfactor,MAFELISA试剂盒HDL-C(HumanHighdensitylipoproteincholesterol)ELISAKit,人高密度脂蛋白胆固醇Elisa检测试剂盒人Elisa试剂盒,人ACAST-DⅣ Elisa试剂盒,HumanautoantibodiesagainsttheC-terminaldomainⅣ,ACAST-DⅣELISA试剂盒LPL ELISA Kit,大鼠脂蛋白脂酶Elisa检测试剂盒大鼠卵泡抑素(FS)ELISA试剂盒Rat Follistatin,FS ELISA试剂盒大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)ELISA试剂盒 Rat Visceral adipose-specific serine protease inhibitor,vaspin ELISA试剂盒 Elisa供应,白介素7IL-7ELISA试剂盒,96T/48THuman Parathyroid Hormone-Like Related Protein,PTHrP ELISA试剂盒人(PTHrP)kit说明书,甲状旁腺激素相关蛋白Elisa试剂盒人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA试剂盒Human basic fibroblast growth factor 9,bFGF-9 ELISA试剂盒 大鼠Elisa试剂盒,大鼠SHBG Elisa试剂盒,Ratsexhormone-bindingglobulin,SHBGELISA试剂盒Rat Alpha-fetoprotein,AFP ELISA Kit,大鼠elisa试剂盒,大鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白试剂盒,(AFP)Elisa试剂盒人瘦素(LEP)ELISA试剂盒Human Leptin,LEP ELISA试剂盒 Human Angiotensinase ELISA Kit,人elisa试剂盒,人血管紧张肽酶试剂盒,(Angiotensinase)Elisa试剂盒 人黑色素细胞抗体(MC Ab)ELISA试剂盒Human melanocyte antibody,MC Ab ELISA试剂盒MSA(Humanmitoticspindleapparatusantibody)ELISAKit,人抗纺锤体抗体Elisa检测试剂盒Mouse Bladder tumor antigen,BTA ELISA试剂盒小鼠(BTA)kit说明书,膀胱肿瘤抗原Elisa试剂盒Human ovalbumin specific IgG,OVA sIgG ELISA Kit ,人elisa试剂盒,人卵清蛋白特异性IgG试剂盒,(OVA sIgG)Elisa试剂盒 Elisa供应,其它白介素受体系列ELISA试剂盒,96T/48TEotaxin1/CCL11(MouseEotaxin1)ELISAKit,小鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白Elisa检测试剂盒
C-P,BIM人C肽ELISA试剂盒哪家好
l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中人C肽(C-P)的含量。
l 有效期:6个月
l 保存条件:2-8℃
l 本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断
工作原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人C肽(C-P)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人C肽(C-P)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样本处理及要求
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本处理
1. 本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。
2. 实验前应预测标本含量,如果标本浓度过高,应对标本进行稀释,使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。
3. 若所检样本不包含在说明书所列样本之中,建议进行预实验验证其有效性,并注意留存样本。
4. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
5. 若样本为细胞培养上清,因该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采样时间等,所以可能存在检测不出的情况。
6. 某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配,而不被检测出。
7. 建议使用新鲜样本,保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪(450nm)
2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
试剂盒组成
名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
微孔酶标板 | 8孔×12条 | 8孔×6条 | 无 |
标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
底物A | 6mL | 3mL | 无 |
底物B | 6mL | 3mL | 无 |
终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
备注:
1. 标准品浓度依次为:8、4、2、1、0.5、0 ng/mL
2. 经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。
性能特点
1. 检测范围:0.25 ng/mL – 8 ng/mL。
2. 灵敏度:最低检测浓度小于0.1 ng/mL。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
说明
1. 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析,本产品可能存在一定的质量技术风险。
2. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关,请务必准备充足的标本备份。
3. 不同批次的同一产品可能会有少许差别,如:检测限、灵敏度以及显色时间等,请依据试剂盒内说明书进行实验操作,网站电子版说明书仅作参考。
4. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果,不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。
常见问题
若实验效果不好,请及时对显色结果拍照,保留所用板条及未使用试剂,并妥善保存,然后联系我公司技术支持为您解决问题。同时您也可以参考以下资料:
问题 | 可能原因 | 解决方案 |
标准曲线差 | 吸取及洗涤不充分 | 充分的吸取及洗涤 |
移液不精确 | 检查和校正移液器 | |
精密度低 | 洗涤不充分 | 按说明书要求充分洗涤和浸泡 |
混匀不充分和吸取试剂不足 | 充分混匀和吸取试剂 | |
重复利用吸头、容器和覆膜 | 使用加样器要更换新的吸头、使用新的容器和覆膜 | |
加样不精确 | 检查和校正移液器 | |
O.D值低 | 每孔加的试剂量不精确 | 校正移液器,精确加入试剂 |
温育时间不正确 | 保证充足的温育时间 | |
温育温度不正确 | 试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度 | |
酶标记物或底物失效 | 通过混合酶标记物和底物,颜色应迅速显现来检查 | |
没有加入终止液 | 按照说明书实验操作步骤加入终止液 | |
超出读数时间读数 | 在说明书推荐的读数时间内读数 | |
样本值 | 不正确的样本储存方式 | 正确储存样本,使用新鲜样本进行实验 |
不正确的样本收集和处理方法 | 采取正确的样本收集和处理方法 | |
待测物质在样本中含量低 | 使用新鲜样本,重复实验 |
人elisa检测试剂盒
人衔接蛋白酶活化因子1(APAF1)elisa试剂盒
人锚蛋白B(Ank-B)elisa试剂盒
人潜伏膜蛋白1(LMP-1)elisa试剂盒
人重组激活基因2(RAG-2)elisa试剂盒
人重组激活基因1(RAG-1)elisa试剂盒
人NOD样受体(NLR)elisa试剂盒
人视黄酸诱导基因/RIG-1样受体(RLR)elisa试剂盒
人清道夫受体B(SRB/CD36)elisa试剂盒
人杀菌肽B(CecB)elisa试剂盒
人抗菌肽(Att)elisa试剂盒
人颗粒溶素(GNLY)elisa试剂盒
人富组蛋白(HTN5)elisa试剂盒
人免疫球蛋白样转录体受体(ILTsR/LIR/CD85)elisa试剂盒
人细胞绒毛蛋白/埃兹蛋白(CVL)elisa试剂盒
人嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)elisa试剂盒
人肌养蛋白(dystrophin)elisa试剂盒
人胶原凝集素(Collectin)elisa试剂盒
人伴侣蛋白10(CPN10)elisa试剂盒
人纤调蛋白(FMOD)elisa试剂盒
人钙网蛋白(CRT)elisa试剂盒
人网膜素(omentin)elisa试剂盒
人基质泗然劝彼岬鞍祝∕GP)elisa试剂盒
人基质裂解蛋白/基质溶素(MAT)elisa试剂盒
人螺旋肽(THP)elisa试剂盒
【金益柏案例:常州老客户吕老师订两盒ELISA试剂盒】
常州市客户吕老师一直是我南京金益柏的老客户,之前在南京金益柏订购了好几次ELISA试剂盒,由于产品确实不错,ELISA试剂盒也具备高灵敏性,能够便于测试出数据。
所以这次吕老师上线后就直接找我们南京金益柏的李经理订购elisa试剂盒,吕老师要订购的ELISA试剂盒一个是人TNF-a ELISA试剂盒和人IL10 ELISA试剂盒,都是10块板子,确定货期2-3周之后,吕老师就下单了,出于信任,吕老师从金益柏订购了许多做实验要用的ELISA试剂盒,我们的质量有保障,售后完全!
人C肽Elisa试剂盒,(C-Peptide)Elisa试剂盒 进口分装原装,欢迎新老客户前来咨询。
Elisa试剂盒实验规则: YS00790B 人C肽Elisa试剂盒,(C-Peptide)Elisa试剂盒 Human C-Peptide ELISA Kit YS00791B 人绒毛膜促性腺激素Elisa试剂盒,(HCG)Elisa试剂盒 Human Chorionic Gonadotrophin,HCG ELISA Kit YS00792B 人绒毛膜促性腺激素βElisa试剂盒,(β-HCG)Elisa试剂盒 Human Chorionic Gonadotrophin β,β-HCG ELISA Kit YS00793B 人促黄体激素Elisa试剂盒,(LH)Elisa试剂盒 Human luteotropic hormone,LH ELISA Kit YS00794B 人前列腺素F2αElisa试剂盒,(PGF2α)Elisa试剂盒 Human Prostaglandin F2α,PGF2α ELISA Kit YS00795B 人伴侣蛋白10Elisa试剂盒,(CPN10)Elisa试剂盒 Human chaperonin 10,CPN10 ELISA Kit YS00796B 人胎盘核糖核酸抑止剂Elisa试剂盒,(HPRI)Elisa试剂盒 Human placental ribonuclease inhibitor,HPRI ELISA Kit YS00797B 人胎盘蛋白Elisa试剂盒,(PP)Elisa试剂盒 Human placental protein,PP ELISA Kit YS00798B 人胎盘催乳素Elisa试剂盒,(HPL)Elisa试剂盒 Human placenta lactogen,HPL ELISA Kit YS00799B 人孕酮受体Elisa试剂盒,(PGR)Elisa试剂盒 Human progesterone receptor,PGR ELISA Kit YS00800B 人新生儿促甲状腺素Elisa试剂盒,(N-TSH)Elisa试剂盒 Human Neonatal Thyroid Stimulating Hormone,N-TSH ELISA Kit
1、要移液枪的性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行确定。但有专业人员进行矫正。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。
4、实验时,要使底物避光保存。
5、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不。
6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
7、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
8、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
9、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
10、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
11、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可保存。
12、底物是光敏感的,要在临用前现配。
13、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
14、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
15、待检样品要澄清,否则会影响结果。
16、温浴时间应遵守试剂盒规定。
17、应尽量做双孔实验,这样才能数据的性。
18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
公司提供免费代测服务,欢迎技术咨询:人C肽Elisa试剂盒,(C-Peptide)Elisa试剂盒
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人C肽elisa试剂盒选择
◎试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。
◎灵敏度:有二层含义,1)为试剂检出被检物质的最低量的能力;2)为试剂对大量样品中阳性检出的能力。
◎特异性:常用交叉反应率表示。含有与待测物相近结构部份的物质可能存在交叉反应,使测定结果升高,可能导致假阳性,所以交叉反应是评价其质量的关键指标。
◎精密度:ELISA试剂一般指其批内CV%,其值应小于15%;定量试剂应同时考察线性范围。
◎准确度:通过添加回收实验进行评价。
◎简便性:指在不影响试剂的前三项指标的前题下,实验和测定步骤越少越好,在定性实验中结果判断简单明了,定量试验结果计算也应简单。
◎安全性:指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。
◎经济性:试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本,而市场价格比较合理。
◎试剂评价:需要有权威的确证方法和确证的样品进行检测。
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人C肽ELISA试剂盒价格,现货人C-Peptide试剂盒开学特价开学促销价格,现货人M-AChRM1试剂盒开学特价迎开学,大促销!特价低价,厂家价格,可以享受特价/折上折等优惠!期待您的来电:【elisa试剂盒订购热线】电话:15810802415 座机: QQ:
人C肽elisa试剂盒参数:
编号 | 中文名称 | 英文名称 | 规格 |
F3093-B | 人C肽elisa试剂盒 | Human C-Peptide elisa Kit | 96T |
编号 | 中文名称 | 英文名称 | 规格 |
F3093-B | 人C肽elisa试剂盒 | Human C-Peptide elisa Kit | 96T |
人C肽elisa试剂盒广泛应用在免疫学检验的各领域中,我们来介绍一下更简便的操作说明,编号:F3093-B,英文名称Human C-Peptide elisa Kit
1、人C肽elisa试剂盒操作方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:(1).包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 (2).加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 (3).加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。 (4).加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。 (5).终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 (6).结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
2、人C肽elisa试剂盒操作方法二:用于检测未知抗体的间接法: (1).用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。 (2).加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)(3).于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。 (4).于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟 (5).于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml (6).可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 ELISA是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法,由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素,以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测,既可以做定性试验也可以做定量分析等优点,已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。
3、临床标本的收集和保存 用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清(浆),有时因为特定的检测目的,也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集,要注意收集时间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松在早晨4~6点之间,会有一峰值出现:生长激素、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以阵发性方式释放,因此,在测定此类激素时,有必要在密切相连的时间间隔内采取数份血样本,以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时,血清中肾素活性将出现明显增高。再如治疗药物的检测,应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响,只是在处理和保存方面要考虑。
(1)要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,因此,在以HRP为标记酶的ELISA测定中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色。(2)样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染,一则细菌的生长,其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。(3)血清标本如是以无菌操作分离,则可以在2~8℃下保存一周,如为有菌操作,则建议冰冻保存。样本的长时间保存,应在-70℃以下。(4)冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。此外,冻融标本的混匀亦应注意,不要进行剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。(5)标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时,应离心沉淀后取上清检测。
4、试剂准备 在临床实验室,对试剂准备一般不太注意,通常的做法是,在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是,在实验开始前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20分钟以上后,再进行测定,以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。其次,目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制,因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。此外,当试剂盒以OPD为底物时,则底物溶液应在反应显色前临时配制。
在现在的ELISA商品试剂盒中,血清样本的加入几乎是唯一的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意的关键点是:加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象,这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附,从而引起非特异显色。所以,有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的错误所致。
四、温育温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。温育这一步是临床ELISA测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。