人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)elisa试剂盒(种属齐全)可免费代测
贮藏:2-8℃,避光防潮保存。有效期:6个月用途:本产品仅供科学研究规格:48T/96T(可提供免费代测服务)1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。2.灵敏度:最低检测浓度小于10 pg/ml。3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。问题回答
人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒(种属齐全)组成:
1、酶联板(assay plate ):一块(96孔或者48孔)。2、标准品(standard):2瓶(冻干品)。3、样品稀释液(sample diluent):1×20ml/瓶。4、生物素标记抗体稀释液(biotin-antibody diluent):1×10ml/瓶。5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (hrp-avidin diluent):1×10ml/瓶。6、生物素标记抗体(biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)7、辣根过氧化物酶标记亲和素(hrp-avidin):1×120μl/瓶(1:100)8、底物溶液(tmb substrate):1×10ml/瓶。9、浓洗涤液(wash buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10、终止液(stop solution):1×10ml/瓶(2n h2so4)。
人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒(种属齐全)
问:新鲜采集后直接零下20度冻存的可以呗,放在95%的酒精里保存的样品可以吗?答:可以的问:我们算出来的ACH含量为什么出现负值?答:说明个别样本的浓度很低,当浓度接近第6个点的时候 直线方程就有可能计算出负值问:一个孔需要多少量的血清?答:一个孔上样量微升。问:那标准品出现跳孔是怎么回事?答:你完全可以拿同样的标准品再重新做一次 ,做之前摇匀一下,肯定可以做好 。那是操作问题了 ,你可以再做一次的,之前也有客户出现过类似的问题 学生做了2次都没做好 后来老师自己做 就是摇匀了一下,其他操作都一样 标准曲线做的很完美。
人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒(种属齐全)实验操作时需注意事项:
1.标准品的稀释与加样2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将30(48t的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48t的20倍)倍稀释后备用。5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂a50μl,再加入显色剂b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒(种属齐全)其他产品:
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一、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA检测试剂盒实验原理
9月10日消息,据上海臻科午间发表:人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA检测试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
二、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA检测试剂盒产品优势
1、优点明显 产品具有灵敏度高、特异性强的特点,具有稳定的重复性,吸附性能好,空白值低,并适用于血清血浆 组织匀浆等多种样本类型的检测,方法简单,操作方便,最大限度的节省了实验经费。
2、品质保障 产品保证质量,出库质检把控严格,保障提供给客户的100%是优质产品,运输全程跟踪,公司承诺有任何质量问题包退换,诚信经营,合作共赢。
3、专业定制 应市场需求公司特推出专业定制elisa试剂盒的服务,全程有专业的技术老师跟踪并和客户保持沟通,直到定制成功为止。
4、免费代测 公司承诺订购ELISA试剂盒,享全程技术指导并可免费代测,为您分忧。全程有专业技术老师负责代测,收到样本一般7个工作日出结果。
5、服务周到 设立售后服务中心,24小时及时响应,真正做到后顾无忧,不断完善服务体系。
三、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA检测试剂盒标本要求
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
四、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA检测试剂盒操作流程
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
五、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA检测试剂盒注意事项
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
2.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
3.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物请避光保存。
6.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
8.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
六、关于人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA检测试剂盒其他相关试剂
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一、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)酶联免疫分析试剂盒实验原理
9月1日消息,据上海臻科午间发表:人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)酶联免疫分析试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
二、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)酶联免疫分析试剂盒产品优势
1、优点明显 产品具有灵敏度高、特异性强的特点,具有稳定的重复性,吸附性能好,空白值低,并适用于血清血浆 组织匀浆等多种样本类型的检测,方法简单,操作方便,最大限度的节省了实验经费。
2、品质保障 产品保证质量,出库质检把控严格,保障提供给客户的100%是优质产品,运输全程跟踪,公司承诺有任何质量问题包退换,诚信经营,合作共赢。
3、专业定制 应市场需求公司特推出专业定制ELISA试剂盒服务,全程有专业的技术老师跟踪并和客户保持沟通,直到定制成功为止。
4、免费代测 公司承诺订购ELISA试剂盒,享全程技术指导并可免费代测,为您分忧。全程有专业技术老师负责代测,收到样本一般7个工作日出结果。
5、服务周到 设立售后服务中心,24小时及时响应,真正做到后顾无忧,不断完善服务体系。
三、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)酶联免疫分析试剂盒标本要求
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
四、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)酶联免疫分析试剂盒操作流程
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
五、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)酶联免疫分析试剂盒注意事项
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
2.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
3.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物请避光保存。
6.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
8.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
六、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)酶联免疫分析试剂盒常见问题分析
ELISA试剂盒用户:为什么96T 的试剂盒只能检测85个样本,测双标准有什么好处?
臻科生物解答:去掉一个空白和10个标准孔,96T 只能检测85个样本。双标准对照会比单标准测的更加精确。
ELISA试剂盒用户:elisa试剂盒不知道浓度怎么办?
臻科生物解答:每个试剂盒都是有对应的检测范围,比如试剂盒的范围50-1800Pg/ml ,如果样本高于这个检测范围就需要稀释,如果低于这个检测范围那就测不出来了。实验前可以先做个预实验摸索下检测范围。
ELISA试剂盒用户:ELISA试剂盒用什么仪器 对使用什么样的仪器有具体要求吗?
臻科生物解答:ELISA试剂盒检测是配套酶标仪的,对酶标仪没有要求。
ELISA试剂盒用户:生物试剂与ELISA试剂盒的分别不同在哪?
臻科生物解答:ELISA试剂盒就是把该实验需要的试剂按一定用量和比例组合起来的成品.一般都是按做多少次的用量包装.生物试剂那就多了,包装大小也五花八门.
ELISA试剂盒用户:elisa试剂盒可以做临床吗?
臻科生物解答:elisa试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断,如果你是临床的标本做课题实验完全没问题。 检测原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
ELISA试剂盒用户:我有98个样本需要多少用几个盒子?
臻科生物解答:我们试剂盒是 48T 96T 两种规格 可以分别检测 37 85个样本,你需要一个 48T和一个96T 盒子。
ELISA试剂盒用户:收集血清的时候用什么管子?
臻科生物解答:血清一般是用促凝管,普通离心管或者EP管都可以。
ELISA试剂盒用户:ELISA试剂盒中48T和96T的区别是什么?
臻科生物解答:48T和96T代表试剂盒的规格;48T 96T 可以分别检测37 85个样本。
ELISA试剂盒用户:一个孔需要多少量的血清?
臻科生物解答:每个样本的保险量是50ul,实际上样量是10ul考虑到损耗建议至少准备30ul的样本。
如需了解更多,可联系我司客服人员。
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8月28日消息,据上海臻科对行业的市场透露: 人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
二、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒产品优势
1. 品种齐全、质量可靠、灵敏度高、稳定性好、操作简便
2.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3.重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
4.同城(上海)需要代测可免费上门取样,享送货上门的服务。
5.根据客户需求可以根据客户的要求定制ELISA试剂盒。
6.臻科生物可提供全方位的售前、售中、售后技术支持,为您解决实验过程中遇到的问题。
三、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒标本要求
1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。*后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
注:标本溶血会影响*后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
四、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒组成
名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×8条 | 无 |
标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
底物A | 6mL | 3mL | 无 |
底物B | 6mL | 3mL | 无 |
终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
五、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒操作流程
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
六、人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
5. 封板膜只限一次性使用,避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。底物请避光保存
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
七、关于人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒特别声明
公司长期与各大高校、医院及权威科研单位保持着良好的合作关系,公司的产品质量及服务态度得到了他们的一致认可。臻科生物本着客户至上的原则为客户提供高质量高品质的产品,公司承诺如有任何质量的问题免费包退换(非人为因素造成的)。可根据客户要求定制ELISA试剂盒,并承诺直到客户满意为止。如您想要了解更多技术参数可以直接联系我司客服人员。
人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)elisa试剂盒上海润裕生物科技有限公司等科研产品,我公司ELISA试剂盒和免疫组化试剂盒产品质量可靠,ELISA试剂盒(酶联免疫分析试剂盒)专业技术团队提供免费代测服务及售后指导。所以生物试剂产品用于科研实验领域,如有需要请直接来电或给我们留言(半个工作日内给您回复)。
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主要成分:酶标板,试剂,标准品等
性状:盒装液体
ELISA试剂盒实验标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
ELISA试剂盒种属齐全:人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。
产品运输方面:部分现货供应,一般为快递运输,江浙沪隔天到,外地及偏远地方三至五天时间到货
2、检测原理:采用双抗体夹心ABC-ELISA法。
3、服务承诺:工作时间内免费技术咨询和指导,提供来样检测及免费代测服务,保证实验结果的有效性。
4、研究领域:炎症研究、神经生物学、肿瘤研究、新陈代谢、信号通路、免疫学、传染病、其他研究。
如果人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒所检测的样本不是连续的,所以实验中不用的板条立即放回包装中,密闭封口,4℃可保存1个 月。其余不用试剂应包装好或盖好。在做样本检测前要有一个完整的计划,如标本编号、所测项目、目的等。操作时尽量使用一次性的吸头,避免交叉污染。
主要分为以下系列:
1、细胞因子检测试剂盒
2、内分泌检测试剂盒
3、肝纤维化检测试剂盒
4、心肌梗塞检测试剂盒
5、肿瘤标志物检测试剂盒
6、自身免疫检测试剂盒
7、优生优育检测试剂盒
8、传染病检测试剂盒等等。
人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒操作步骤
方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
方法二 用于检测未知抗体的间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒注意事项
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒实验中,选择好各项ELISA实验条件是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
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