TW-E5423小鼠白介素37(IL-37)ELISA试剂盒

小鼠白介素37(IL-37)ELISA试剂盒

产品简介

白细胞介素37（IL-37），也被称为IL-1家族成员7（IL-1F7），是一种抗炎细胞因子，它属于白细胞介素-1家族。该蛋白由位于2号染色体上的IL37基因编码，IL-37经过替代剪接，有5种不同的剪接变体，IL-37a-e,IL-37b是最大的和研究最多的一个，它与白细胞介素-1家族中的β桶状结构相同。

测定原理

本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术 : 将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物IL-37，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中IL-37的浓度。

需要的其他材料

1. 酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；

2. 移液器及枪头；

3. 蒸馏水或去离子水；

4. 100-1000 mL刻度量筒；

5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；

6.水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度；

7. 用于稀释标准品和样品的试管。

样品保存

样品收集后若在1 周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

试剂准备工作

使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。

洗涤液/稀释液配置

如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）

操作流程

所有标准品、样品建议复孔检测

1. 酶标板准备：确定试验所需要的孔数，取下未使用的酶标条放回装有干燥剂的铝箔袋。

2. 样本孵育：每孔分别加入100µL不同浓度的标准品以及预处理过的待测样品（建议样本用通用稀释液最少稀释1倍上样，目的是减少基质效应），盖上封板胶纸，37℃避光反应1 h。孵育结束后，每孔加入300µL 1×洗涤缓冲液，轻轻晃动30秒，甩干并在纸上拍干，以这种方式清洗3次。

3. 抗体孵育：每孔加入100µL生物素化抗体工作液，轻轻混匀，盖上封板胶纸，37℃避光反应1h。孵育结束后，重复步骤2中的清洗方式清洗4次。

4. 酶标孵育：每孔加入100µL 1×SA-HRP工作液，盖上封板胶纸，37℃避光反应30分钟，清洗4次，拍干。

5. 底物显色：每孔首先加入50µL显色液A，随后加入50µL显色液B，轻轻混匀，盖上封板胶纸，37℃避光反应15分钟。

6 .终止反应：待显色反应结束后，每孔加入50µL终止液，轻轻混匀，5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
标准品配置

试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先从640pg/mL标准品（200µL）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至32pg/mL（例：50µL的标准品母液+950µL的1×稀释液，制备得到1000µL的32pg/mL浓度标准品），随后在6个试管中分别加入500µL的1×稀释液，在这6个单独的试管中将32pg/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为: 32pg/mL、 16pg/mL、 8pg/mL、 4pg/mL、 2pg/mL、 1pg/mL、 0.5pg/mL，从最高浓度标准品溶液中吸取500µL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0pg/mL)。

抗体工作液配置

使用前10分钟，将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液，根据所需用量当日配置当日使用。

酶结合物工作液配置

使用前10分钟，将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液，根据所需用量配置。

备注：如待测样本中IL-37浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数。

结果的计算

计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。

示例数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

下图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果

重复性

板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%。

小鼠白介素37(IL-37)ELISA试剂盒

灵敏度

经样本测试，本试剂盒的检测范围为0.5 - 32pg/mLL，灵敏度为0.25pg/mL。
特异性

该试剂盒测定可识别重组小鼠IL-37。

其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。

使用本ELISA试剂盒之前，请您必须完整阅读说明书(可咨询索取），本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断和治疗。

来源：上海通蔚实业有限公司