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大鼠总抗氧化力（TAOC）酶联免疫分析说明

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文件大小：54kb

上传时间：2015/5/18 17:08:41

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上传者：北京杰辉博高生物科技有限公司

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使用目的：

本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中总抗氧化力（TAOC）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠总抗氧化力（TAOC）水平。用纯化的大鼠总抗氧化力（TAOC）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入总抗氧化力（TAOC），再与HRP标记的总抗氧化力（TAOC）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的总抗氧化力（TAOC）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠总抗氧化力（TAOC）浓度。

操作步骤

标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

8U/ml	5号标准品	150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
4U/ml	4号标准品	150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
2U/ml	3号标准品	150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
1U/ml	2号标准品	150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
0.5U/ml	1号标准品	150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。