ELISA操作结果判断过程常见问题及解答

1） 标准曲线线性差，或者没有运行标准曲线；质控不在控。

2） 出现假阴性结果或假阳性结果

3） 测定结果的重复性差

4） 全部板孔不显色或全部显色，无法判断结果

解决方法：

1）加样时，不同浓度标准品使用不同枪头。标准品稀释过程要保证量和均匀性。标准品可做复孔测定，明显偏离的标准品可舍去。每次测试，都要运行标准品和质控品，以保证结果的准确。质控品不在质控单检测范围内时，说明实验无效，不能报告实验结果，需要重新检测。

2）出现假阴性样本可能是孵育温度和时间不足，酶标记物加样量不足，显色时间短等原因，读数时终止时间过长等，应严格按照说明书操作要求进行；

出现假阳性样本可能是洗涤不充分，酶过量，类风湿因子干扰，样本溶血，脂血等，实验过程中，注意样本要求，洗板步骤，保证充分洗板，酶标记物加样量要准确，显色时间充分，终止后尽快读板等。

3）重复性差可能是加样本及试剂量不准，孔间不一致 ；加样过快，孔间发生污染 ；加错样本 ；加样本及试剂时，加在孔壁 ；不同批号试剂盒中组分混用 ；温育时间、洗板、显色时间不一致等，实验过程要注意上述操作。

4）整板不显色可能是忘记加酶或者试剂失效，酶污染，错加试剂等；整板显色可能是洗涤液被酶污染，显色液变质，包被板不干净等；实验过程中，应注意避免试剂的污染或交叉污染，加样前认真辨别试剂，避免错误加样。