（日本IBL 27417）
简介
人硫氧还蛋白由105个氨基酸组成，分子量为120道尔顿的蛋白，通过活性位点上两个邻近的半胱氨酸反应来调节体内的氧化还原反应状态。
众所周知，硫氧还蛋白是因应激诱导产生的，如紫外线，辐射，氧化剂和病毒感染，并作为一个生化防御因子抵抗应激力，且有抗氧化作用和调节细胞内信号分子和转录因子的活性。
因此，检测硫氧还蛋白不仅可以检测体内应激状态，还可提高抗逆性研究的进展
实验原理
此试剂盒根据酶免法的夹心原理，利用两种高特异性抗体，TMB作为一种着色剂，颜色的强度与人硫氧还蛋白的量成正比
检测范围：3.91—250ng/ml
预期用途
1. 此试剂盒用于血清，EDTA血浆，尿液和上清中的人硫氧还蛋白的定量检测
2. 以防上清介质中含有FCS，我们建议设置一中阴性质控作为试验样品空白孔
试剂盒组成
1. 预包被板，96孔，抗人硫氧还蛋白小鼠IgG单抗亲和纯化
2. 标记抗体浓缩液，0.4mlx1，,30X，HRP标记抗人硫氧还蛋白兔IgGFab’亲和纯化
3. 标准品，1.0mlx2，重组人硫氧还蛋白
4. EIA缓冲液，30mlx1，1%BSA，含0.05%吐温20的PBS
5. 标记抗体稀释液，12mlx1，1%BSA，含0.05%吐温20的PBS
6. 着色剂，15mlx1，TMB底物液
7. 终止液，12mlx1，1N硫酸
8. 洗涤缓冲浓缩液，50mlx1,40X，含0.05%吐温20的磷酸缓冲液
实验所需材料但试剂盒未提供
1. 酶标仪
2. 移液器和枪头
3. 烧杯
4. 去离子水
5. 吸水纸
6. 用于稀释标准品的试管
7. 洗瓶
8. 一次性试验管
试剂准备
1. 洗涤缓冲液制备：先将洗涤浓缩液平衡至室温，充分混匀，然后吸取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀，即得。配制的洗涤液应保存于冰箱内，并于2周内用完
2. 标记抗体的制备：用标记抗体稀释液将标记抗体稀释30倍，即得。
如：如果只测一条板，8孔，则需要标记抗体800ul（30ul的标记抗体+870ul的标记抗体稀释液，混匀，使用时每孔加100ul）
此步骤在实验前完成
剩余的标记抗体浓缩应装于密封瓶内，保存在4℃
3. 标准品的制备：吸取1.0ml的去离子水至标准品瓶内，充分混匀，得到500ng/ml的人硫氧还蛋白标准品
4. 标准品的稀释：准备8个试管用于标准品的稀释，每管加入230ul的EIA缓冲液
每管的浓度如下
1号管 250ng/ml
2号管 125ng/ml
3号管 62.5ng/ml
4号管 31.25ng/ml
5号管 15.63ng/ml
6号管 7.81ng/ml
7号管 3.91ng/ml
8号管 0ng/ml（试验样品空白）
吸取230ul的标准品于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管，依次连续稀释，标准品范围为250~3.91ng/ml
5. 样品稀释：样品用EIA缓冲液稀释。如果样品浓度事先没有建立，我们建议，先用几个不同稀释比例的样品进行检测，来确定样品最佳稀释比例
第3年
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