人血管生成素样蛋白3 （超敏）试剂盒
日本IBL 编号: 27750
简介
血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)是由肝脏分泌的一种类激素蛋白，参与脂质新陈代谢和血管生成。血管生成素样蛋白3的结构与参与血管生成的血管生成素家族蛋白相似。它有螺旋域和纤维蛋白原样域，但没发现能与Tie家族结合。研究发现，ANGPTL3的基因表达受LXR因子调控，是一种备受关注的新颖分泌因子
实验原理
此试剂盒是一种夹心法的ELISA试剂盒，使用了两种高特异性的抗体。TMB作为显色剂，显色的强度与人样品中ANGPTL3的量成正比
检测范围:
0.47 - 30 ng/mL
预期用途
此日本IBL人血管生成素样蛋白3ELISA检测试剂盒能用于人血清，EDTA血浆和细胞培养基上清中人血管生成素样蛋白3（ANGPTL3）的定量检测
试剂盒组成
1. 微孔板：
包被有抗人ANGPTL3 (45B1)小鼠IgG单抗，亲合纯化 96孔x 1
2. 标记抗体：
（30倍浓缩），HRP标记抗人ANGPTL3 (F48A1)小鼠IgG，亲合纯化0.4mlx 1
3. 标准品：重组人血管生成素样蛋白3 0.5mL x 2
4. EIA缓冲液： 30mL x 1
5. 标记抗体稀释液：1%的BSA，含0.05%的吐温20的PBS 12mL x 1
6. 显色剂：TMB底物液 15mL x 1
7. 终止液：1N硫酸 12mL x 1
8. 洗涤缓冲浓缩液:（40倍浓缩），0.05%吐温20的磷酸缓冲液 50mL x 1
操作指南
实验所需材料但试剂盒未提供
酶标仪（450nm） 移液器和枪头
量筒和烧杯 去离子水
冰箱（4℃） 坐标纸（对数/对数）
吸水纸 标准品稀释试管
孵箱（37±1℃）
洗瓶（用于洗板）
一次性试验试管
试剂准备
1. 洗涤缓冲液制备：
此洗涤液是一种40倍浓缩液。先将洗涤浓缩液平衡至室温，充分混匀，然后吸取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀，即得。配制的洗涤液应保存于冰箱内，并于2周内用完
2. 稀释标记抗体的制备：
标记抗体是一种30倍浓缩液，用标记抗体稀释液将标记抗体稀释30倍，即得。
例：如果只测一条板，8孔，则需要标记抗体800ul（30ul的标记抗体+870ul的标记抗体稀释液，混匀，使用时每孔加100ul）
浓缩酶标记抗体需稀释后才能用于实验
剩余的浓缩标记抗体应装于密封瓶内，保存在4℃
3. 标准品的制备：吸取0.5ml的去离子水至标准品瓶内，充分混匀，得到60 ng/mL的人ANGPTL3标准品
4. 标准品的稀释：准备8个试管用于标准品的稀释，每管加入230ul的EIA缓冲液
每管的浓度如下
1号管 30ng/ml
2号管 15ng/ml
3号管 7.5ng/ml
4号管 3.75ng/ml
5号管 1.88ng/ml
6号管 0.94ng/ml
7号管 0.47ng/ml
8号管 0ng/ml（试验样品空白）
吸取230ul的标准品于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管，依次连续进行2倍比稀释，标准品范围为0.47~30ng/ml.第8管为样品空白，浓度为0 ng/mL
5. 样品稀释：
样品如需稀释，必须用EIA缓冲液稀释，若预先不知样本浓度的大概范围，则需对样本进行几个不同稀释比例的预实验，然后确定最佳稀释比例
第3年
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