人心脏特异性肌钙蛋白I酶联免疫试剂盒
美国cortez 1105Z
预期使用
此elisa试剂盒可用于人血清中心脏肌钙蛋白I的定量检测。肌钙蛋白I的检测在急性心肌梗塞疾病的评估中具有重要意义。
前言
肌钙蛋白是调节横纹肌收缩或抑制的蛋白质复合体。它位于细丝上以周期与肌肉结合，包括3个不同的蛋白质：肌钙蛋白I、肌钙蛋白C和肌钙蛋白T。同样地，肌钙蛋白I存在3个亚单位：2个在快骨骼肌亚型和慢骨骼肌亚型，一个心肌亚型。心肌亚型（cTnI）分子量为22500道尔顿，并有31个额外的氨基酸残基，相对两种骨骼肌亚型约有40%的不同源性。心肌亚型的免疫体不同于两种骨骼肌亚型，肌钙蛋白I独特的心肌亚型和组织特异性是诊断急性心肌梗塞（AMI）的基础。心肌肌钙蛋白I（cTnI）已经被用于急诊科胸痛病人的鉴别诊断。当血液中敏感和特异性的生物标志物如肌钙蛋白、CK-MB和肌红蛋白的水平升高，在临床急性缺血时诊断为心肌梗死。心肌损伤的首选标志物是心肌肌钙蛋白（I或T）心肌肌钙蛋白有心肌组织特异性和高度的灵敏度。同样地心肌肌钙蛋白和CK-MB有相似的释放模式（胸痛开始后4—6h升高）但升高的肌钙蛋白水平能在血液中保持更长的时间（6—10天），因此为心肌损伤的检测提供了更长的窗口期。
正常血液中肌钙蛋白I的水平非常低，急性心梗（AMI）开始后4—6小时可在血清中检测到，12—24小时浓度达到峰值。事实上cTnI在血液中升高的时间更长，为心肌缺血开始后诊断心肌梗死和围手术期血清骨骼肌蛋白升高造成的梗死增加了检测灵敏度和特异性。
此外，近期数据已经确定心肌肌钙蛋白和局部胸部不适后的长期预后之间的检测关系。研究表明，检测心肌肌钙蛋白在划分不稳定性心绞痛病人的高风险群体有很高的预测价值，并且这些检测在急诊科患者的病情评估上特别有用。
此试剂盒提供了一种快速、灵敏和可靠的定量检测心肌肌钙蛋白I的方法。抗体浓度最小1.0ng/ml，且与心脏肌钙蛋白T或骨骼肌钙蛋白T或I没有交叉反应。
实验原理
该试剂盒是基于固相酶联免疫吸附检测试验。该实验利用4种针对不同抗原决定簇的特异性单克隆抗体。三种的小鼠抗肌钙蛋白I单克隆抗体于包被孔中。第四种为酶（辣根过氧化物酶）标记抗体。实验样本同时与四种抗体反应，导致肌钙蛋白I分子如三文治被固相和酶标抗体夹着。经在室温90分钟的温育，使用蒸馏水洗涤包被孔，去除未结合的抗体。加入TMB试剂并温育20分钟，结果会形成蓝色。加入1N的盐酸终止反应，并由蓝色转为黄色。实验样本的肌钙蛋白I浓度与颜色强度成正比。于450nm处检测吸光度。
试剂盒组成：
1) 包被板：包被板的微孔中包被了抗肌钙蛋白I的鼠单克隆抗体,96孔
2) 标准品系列：0；2.0；7.5；30；75ng/ml,1.0ml/瓶
3) 酶联物：13ml/瓶，内含辣根过氧酶标记的抗肌钙蛋白I鼠单克隆抗体、Tris缓冲液和含BSA的防腐剂。
4) TMB底物液：11ml/瓶，内含TMB底物液。
5) 终止液：11ml/瓶，内含已稀释好的HCl（1N）。
所需的材料
1、 双蒸水或者去离子水
2、 移液器：5 μl、10 μl、50 μl、100 μl 和 1.0 ml
3、 一次性的吸嘴
4、 酶标仪（450nm）
5、 旋涡混合器
6、 吸水纸
7、 坐标纸
8、心脏标记物肌钙蛋白I质控品；货号为685(Bio-Rad Laboratories Diagnostics Group, Hercules,CA 94547)
试剂贮存条件：
1） 试剂盒不使用时必须贮存于2-8°C的环境中，有效期内稳定。具体效期请见试剂盒标签。
2） 将包被板密封于含干燥剂的包装袋中，避免接触潮湿空气。
试剂准备：
1实验前将试剂平衡至室温。
2用1ml的蒸馏水溶解每个标准品，静止20分钟并混匀。溶解后的标准品在2－－8℃下只能保存8小时，重溶超过8小时的标准品应舍去。为了最大程度的保证已稀释标准品的稳定性，我们应当将其分装冻存于-20℃或更低温度的环境下，每份标准品只能冻融一次。
3样品中肌钙蛋白I含量可能高于100ng/ml的样品可用稀释液稀释后，再定量检测。
使用的酶标仪带宽为10nm或者更少，并且在450nm波长检测的吸光度范围0—3 OD或者更高是可以接受的。
第3年
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