人瘦素（超敏）酶免试验检测试剂
（日本IBL 27775）
简介
1950年发现隐性肥胖基因突变导致肥胖，且与二型糖尿病综合征的病态肥胖类似。1994年在洛克菲勒大学Freidman团队发现肥胖基因编码形成瘦素。瘦素是由肥胖基因产生的16KDa的分泌型蛋白。脂肪组织产生瘦素并释放至血液中，随着脂肪的累积，血液中瘦素的水平含量也呈增长趋势。瘦素作为lipostat，随着脂肪组织内脂肪的沉积而增加；它还可作为一激素，指令大脑终止食物的消化和增加活动；还证明了可用于标记和控制青春期的开始；另外，近期研究表明，瘦素可通过中枢神经系统抑制骨形成。
实验原理
此试剂盒是一种夹心法的ELISA试剂盒，使用了两种高特异性的抗体。TMB作为显色剂，最终溶液所显示的颜色强度与样品中瘦素的量成正比
检测范围
15.63~1000pg/mL
预期用途
此试剂盒用于人血清，EDTA-血浆和细胞上清中瘦素的定量检测，重组的和天然的瘦素都可用此试剂盒检测。
试剂盒组成
1. 微孔板，96T，包被有抗人瘦素兔子IgG抗体，亲和纯化
2. 标记抗体浓缩，30X，0.4ml，HRP标记的抗人瘦素兔IgG Fab片段
3. 标准品，0.5ml，2支，重组人瘦素
4. EIA缓冲液，30ml，1%的BSA，含0.05%的吐温20的PBS
5. 标记抗体稀释液，12ml，1%的BSA，含0.05%的吐温20的PBS
6. 着色剂，TMB，15ml
7. 终止液，1N硫酸，12ml
8. 洗涤缓冲浓缩液，40X，50ml，0.005%吐温20的磷酸缓冲液
准备步骤
试验所需材料但试剂盒未提供
l 酶标仪（450nm）
l 带刻度的量筒与烧杯
l 孵箱（37℃±1℃）
l 吸水纸
l 稀释试管
l 微量移液器和取样吸头
l 去离子水
l 坐标纸（log/log）
l 用于稀释标准品的试管
l 洗涤瓶
特别注意
1. 试验样品采集后应立即检测或是冻存，冻存的样品避免反复冻融，检测前应在低温下先将其完全溶解混匀
2. 试验样品用EIA缓冲液稀释
3. 试验样品和标准品应做双份检测
4. 试验样品应在中性PH范围，有机溶剂的污染可能会影响检测
5. 只能用试剂盒提供的洗涤液洗板，否则会导致试验失败
6. 吸水纸上拍干微孔板，不能擦拭
7. TMB底物液应贮存于黑暗处，因其对光敏感，且避免接触金属
8. 加入终止液后30min内必须酶标仪读数
结果计算
绘制曲线前，所有的数据都应减去试验样品空白值，包括标准品和未知的样品。以标准品的OD值和浓度在对数-对数坐标纸上绘制标准曲线，从标准曲线上可直接读取未知样品的浓度
采用全自动酶标仪检测，只需检测前设置好酶标仪的相关参数，如坐标参数（线性，半对数）和计算方式参数（三次回归、四参数或双对数曲线方程），即可直接得到结果
第3年
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