人APP770酶免试验检测试剂
（日本IBL 27736）
简介
阿尔茨海默病（AD）是典型的老年性痴呆，脑组织内淀粉样蛋白β（Aβ）的累积是造成此病的主要原因，与此同时，患有AD的患者其累积的Aβ90%在脑血管壁上发现。众所周知，Aβ是由可分解出两种蛋白（β-和γ-分泌）的淀粉样前体蛋白（APP）产生的，累积在脑组织内的Aβ分子主要是由神经细胞内的APP表达产生，即APP695.与此相反，另一不同APP即APP770，表达于脑血管内皮细胞，最新报道称，APP770产生的Aβ也在脑血管壁上累积
实验原理
此试剂盒是一种夹心法的ELISA试剂盒，使用了两种高特异性的抗体。TMB作为显色剂，最终溶液所显示的颜色强度与样品中APP770的量成正比
检测范围
0.10~6.2ng/mL
预期用途
仅用于研究，不能用于诊断
此试剂盒用于EDTA-血浆脑脊液和细胞上清中人APP770的定量检测
试剂盒组成
1. 微孔板，96T，包被有抗人APP OX2(351)兔子IgG抗体，亲和纯化
2. 标记抗体浓缩，30X，0.4ml，HRP标记的抗人APP（R101A4）小鼠IgG 单抗Fab片段
3. 标准品，0.5ml，2支，重组人APP770
4. EIA缓冲液，30ml，1%的BSA，含0.05%的吐温20的PBS
5. 标记抗体稀释液，12ml，1%的BSA，含0.05%的吐温20的PBS
6. 着色剂，TMB，15ml
7. 终止液，1N硫酸，12ml
8. 洗涤缓冲浓缩液，40X，50ml，0.005%吐温20的磷酸缓冲液
准备步骤
试验所需材料但试剂盒未提供
l 酶标仪（450nm）
l 带刻度的量筒与烧杯
l 孵箱（37℃±1℃）
l 吸水纸
l 稀释试管
l 微量移液器和取样吸头
l 去离子水
l 坐标纸（log/log）
l 用于稀释标准品的试管
l 洗涤瓶
特别注意
1. 试验样品采集后应立即检测或是冻存，冻存的样品避免反复冻融，检测前应在低温下先将其完全溶解混匀
2. 试验样品用EIA缓冲液稀释
3. 试验样品和标准品应做双份检测
4. 试验样品应在中性PH范围，有机溶剂的污染可能会影响检测
5. 只能用试剂盒提供的洗涤液洗板，否则会导致试验失败
6. 吸水纸上拍干微孔板，不能擦拭
7. TMB底物液应贮存于黑暗处，因其对光敏感，且避免接触金属
8. 加入终止液后30min内必须酶标仪读数
结果计算
绘制曲线前，所有的数据都应减去试验样品空白值，包括标准品和未知的样品。以标准品的OD值和浓度在对数-对数坐标纸上绘制标准曲线，从标准曲线上可直接读取未知样品的浓度
第3年
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