大鼠骨桥蛋白ELISA检测试剂盒

日本IBL (编号:27360)

言简介

骨桥蛋白初是由骨分离出的一种分泌糖蛋白.目,已知它是由多种细胞(包括成骨细胞, 肾小管细胞, 巨噬细胞,激活T细胞, 血管平滑肌细胞)分泌的一种强酸性钙结合磷酸化糖蛋白.据报道,它的分子量约为44 kDa -66 kDa ,具体取决于糖基化程度和磷酸化程度.

骨桥蛋白有一个重要的特征,它含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 氨基酸序列.这种序列广泛存在于纤连蛋白, 玻连蛋白和多种细胞外蛋白,如αvβ3

骨桥蛋白还有另外一个重要的特征,由于RNA拼接, 糖基化, 磷酸化作用, 硫酸盐化作用和蛋白酶敏感性等,使体内多种分子都含有骨桥蛋白.在损伤,发炎, 血管生成,肿瘤组织等部位,骨桥蛋白和凝血酶都很有可能同时存在.骨桥蛋白易受解蛋白片段的影响,并发挥重要生理作用.有报道证明,经凝血酶处理能增强骨桥蛋白细胞的粘附活性,这表明用凝血酶裂解骨桥蛋白后,能暴露隐藏的粘附序列.近有证据表明骨桥蛋白的氨基末端片段包含有能识别α9β1整合素的隐藏结合位点.而且,骨桥蛋白含有多细胞结合位点并能与多种受体发生交互作用.这些交互作用能明显发挥特定的功能.

原理

大鼠试剂盒骨桥蛋白ELISA法27360运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与大鼠骨桥蛋白的量成正比.

检测范围

0.07 - 4.75 ng/mL

预期用途

■此大鼠试剂盒骨桥蛋白ELISA法27360能用于大鼠EDTA血浆,尿液,细胞上清中骨桥蛋白的体外定量检测.注意实验,将样品冻存于–80°C,因为骨桥蛋白分子非常不稳定

■建议大鼠EDTA血浆样品用PBS稀释大于10倍. 如果稀释10倍,样品浓度仍超过高标准品,请进一步稀释后再进行试验.

■用血清和肝素血浆检测样品的值不理想, 因为骨桥蛋白不稳定,易受凝血酶裂解. 并且骨桥蛋白分子有几分肝素结合位点, 因此,检测血清样品会得到错误的结果,而肝素血浆样品的试验真实值也会受到影响.

■尿液样品的稀释倍数随大鼠的种类不同而不同, 因此稀释倍数应视每个实验室优化情况而定. 在一些大鼠种类, 由于尿液样品中没有全长的骨桥蛋白分子,所以不能用elisa试剂盒检测, 由于骨桥蛋白易降解,建议加入蛋白酶抑制剂(如PMSF).而且, 如果样品提取后不能立即检测,请冻存于-80°C或更低. 注意, 反复冻融后样品的检测结果会低于真实值,所以应小心处理.

■细胞上清的稀释倍数随骨桥蛋白的表达水平不同而不同, 具体稀释倍数视每个实验室优化而定.

■ 试剂盒不能检测凝血酶裂解的骨桥蛋白.

■ 试剂盒能检测 重组或天然的大鼠骨桥蛋白.

试剂盒成分

1 预包被板: 抗大鼠骨桥蛋白(O-17)兔子IgG,亲合纯化 96T

2 酶标记抗体:

(30倍浓缩)HRP标记抗大鼠骨桥蛋白(O-165)兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1

3 标准品: 重组大鼠骨桥蛋白 0.5mL x2

4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS30mL x 1

5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS12mL x 1

6 显色剂: TMB底物液15mL x 1

7 终止液: 1N硫酸12mL x 1

8 浓缩洗涤液:

(40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1

操作说明

1实验所需器材(但试剂盒没有提供)

酶标仪(450nm) 微移液管及其枪头

量筒及烧杯 去离子水

冰箱(4°C) 坐标纸(log/log)

吸水纸 试管(用于标准品稀释)

温育箱(37°C ± 1°C) PBS缓冲液(用于样品稀释)

洗瓶 (用于洗板)

一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)