人环氧合酶酶免试验
（日本IBL 27186）
简介
COX是一种膜结合酶，负责花生烯酸氧化生成前列腺素G2（PGG2）以及随后PGG2转变为PHG2。这是各种前列腺素生成的第一步。COX至少有两种不同的亚型，组成表达型COX-1，和诱导型COX-2。COX-1行使着看家功能，如血管止血，肾流血量，肾小球功能维护。COX-2存在于部分细胞内，发出炎症信号，如生长因子，细胞因子和内毒素。
实验原理
试剂盒采用夹心酶免法，采用了两种高特异性抗体，TMB作为着色剂，最终溶液所显示的颜色强度与样品中COX-2的量成正比
检测范围
1.09~70ng/mL
预期用途
1. 试剂盒可用于细胞上清裂解液中人COX-2的检测
细胞培养液
1） 将细胞培养液（1x105~1x107个细胞）加入至0.5ml的IBL裂解液中（货号为#19022）
2） 在振荡器上混匀或用移液枪吹打混匀
3） 2-8℃下旋转30min使其溶解
4） 2-8℃，10000rpm下离心10min
5） 有必要的话用EIA缓冲液稀释上清液
2. 细胞裂解液试验中，建议所用细胞数应一致
3. 建议总蛋白浓度液同时检测，可检测到人COX-2与总蛋白的关系
试剂盒组成
1. 微孔板，96孔，包被有抗人COX-2鼠IgG单抗
2. 酶标抗体浓缩液，30X，HRP标记的抗COX-2兔IgG Fab片段,0.4ml
3. 标准品，重组人COX-2，0.5mlx2
4. EIA缓冲液，30ml
5. 酶标抗体稀释液，内含的1%BSA、0.05%的吐温20的PBS缓冲液，12ml
6. 显色剂，TMB，15ml
7. 终止液，1N硫酸，12ml
8. 洗涤缓冲浓缩液，50ml，40X，0.05%吐温20的磷酸缓冲液
操作指南
实验所需器材但试剂盒不提供
1. 酶标仪（450nm）
2. 微量移液器和取样吸头
3. 带刻度的量筒与烧杯
4. 蒸馏水
5. 温育器（37℃±1℃）
6. 冷床箱（4℃）
7. 坐标纸（log/log）
8. 吸水纸
9. 用于稀释标准品的试管
10. 洗涤瓶
11. 酶标抗体稀释的一次性试管
特别注意
1. 样品采集后应立即检测，如需贮存的，则应放置在冰冻条件下，避免反复冻融，检测前应在低温下将其溶解并完全混合
2. 如有需要，样品可用EIA缓冲液稀释
3. 建议试验样品和标准品做双份检测
4. 试验样品应在中性PH范围内，有机溶剂的污染会影响试验
5. 只能使用试剂盒内提供的洗涤液洗板，洗板不充足可能会导致试验失败
6. 彻底倒去洗涤液，吸水纸上拍干，不能用吸水纸擦拭微孔
7. 底物液应避光保存，因其对光敏感，且要避免接触金属
8. 加入终止液后30min内读数
第3年
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