人血管内皮生长因子（VEGF）ELISA试剂盒
（日本IBL：27171）
前言说明
血管内皮生长因子（VEGF）是一种同型二聚体蛋白，最初人们是从富含正常牛垂体滤泡星形蛋白细胞的基质中分离纯化得到，由各种血管组织分泌。后来人们发现VEGF与一种血管通透因子（VPF）相同， VPF是之前在富含肿瘤细胞系的基质中鉴别得到的，肿瘤细胞可以提高毛细血管的通透性。据报道，VEGF的活性包括促进内皮细胞的生长，促进血管的生成和提高毛细血管的通透性。VEGF是一种分子量为38.2kDa的同型二聚体，它由两条含165个氨基酸的多肽链组成。多数人肿瘤细胞都会分泌VEGF，包括：人肺腺癌、胰腺癌、肝癌、肾癌、纤维肉瘤、HL60早幼粒细胞性白血病、GS-9L神经胶质瘤和U937淋巴瘤细胞。一些正常的组织也会分泌VEGF，如：活化的巨噬细胞、角质化细胞、肝细胞、平滑肌细胞、间质细胞、胚胎成纤维细胞、支气管及脉络丛上皮细胞，肾小球内脏上皮及其系膜细胞。IBL公司的人VEGF ELISA试剂盒可用于人EDTA血浆和细胞培养上清中VEGF的定量检测。
实验原理
此试剂盒
7.81～500pg/ml （第一次温育：4℃下温育过夜）
预期用途
此试剂盒可用于人EDTA血浆和细胞培养上清VEGF的体外定量检测。此试剂可识别天然的和重组的VEGF。利用夹心法的酶联免疫吸附实验，采用了高特异性的多克隆抗体和单克隆抗体。
试剂盒成分
1） 包被板：微孔中包被了抗人VEGF-1（16F1）的鼠IgG单克隆抗体，96孔。
2） 浓缩型酶标抗体：HRP标记的抗人VEGF-1兔IgG Fab片段，30倍浓缩，0.4ml
3） 标准品：内含重组的人VEGF 165，0.5ml×2
4） EIA缓冲液：1%的BSA，含0.05%的吐温的PBS，30ml
5） 酶标抗体稀释液：内含的1%BSA、0.05%吐温20的PBS，12ml
6） 显色剂：TMB底物液，15ml
7） 终止液：1N的H2SO4，12ml
8） 浓缩洗涤液：内含0.05%吐温的磷酸缓冲液（40倍浓缩），50ml。
实验所需器材但试剂盒不提供
l 酶标仪（450nm）
l 带刻度的量筒与烧杯
l 孵箱（37℃±1℃）
l 吸水纸
l 冰箱（4℃）
l 试管
l 微量移液器和取样吸头
l 去离子水
l 坐标纸（log/log）
l 用于稀释标准品的试管
l 洗涤瓶
试剂准备
1. 洗涤缓冲液制备：先将洗涤浓缩液平衡至室温，充分混匀，然后吸取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀，即得。配制的洗涤液应保存于冰箱内，并于2周内使用
第3年
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