内皮素-1 ELISA试剂盒
（日本IBL：27165）
1、前言说明
内皮素-1（一种21个氨基酸分子组成的多肽）是目前所知的最有效的血管收缩剂。1985年Rubanyi研究小组发现了一种多肽并将其命名为内皮源性收缩因子（EDCF），之后Yanagisawa将其分离、测序、克隆，并命名为内皮素，而且认为它是最有效的血管收缩剂，这使得人们了解到它更多的生理功能。内皮素-1（ET-1）是哺乳动物三种血管活性肽家族中的一种，这三种血管活性肽还包括内皮素-2和内皮素-3。这两种相关多肽的2和6号位的氨基酸与ET-1的不同。这些基因可以产生三种前肽，之后可分解成三个含39个氨基酸分子的内皮素分子。我们可以获得一系列内皮素多肽和前肽家族的功能概述和分子生物学知识。ET-1对平滑肌细胞、成纤维细胞有强烈效应，并且它也参与很多疾病过程，特别是心血管疾病。ET-1在充血性心力衰竭、肾衰竭和肺动脉高血压中有重要作用。人的ET-1和牛、犬、鼠、猪、兔和大鼠的ET-1有相同的氨基酸序列。
2、实验原理
此试剂盒是一种夹心法的ELISA试剂盒，整个试剂盒使用了两种高特异性的抗体。TMB作为显色剂，最终溶液所显示的颜色强度与样品中ET-1的量成正比。测量范围：0.78～100pg/ml
3、应用范围
IBL的ET-1 ELISA试剂盒可用于人血清、EDTA血浆、细胞培养液上清和组织提取液中ET-1的定量检测。
4、试剂盒成分
1） 包被板：微孔用抗ET15-21兔IgG包被，96孔。
2） 浓缩型酶标抗体：HRP标记的抗ET-1兔IgG Fab片段，30倍浓缩，0.4ml。
3） 标准品：ET-1，0.5ml×2。
4） EIA缓冲液：内含1%的BSA、0.05%的吐温20的PBS缓冲液，30ml。
5） 用于稀释酶标抗体的稀释液：内含的1%BSA、0.05%的吐温20的PBS缓冲液，12ml。
6） 显色剂：TMB底物液，15ml。
7） 终止液：1N的H2SO4，12ml。
8） 浓缩洗涤液：内含0.05%吐温的磷酸缓冲液（40倍浓缩），50ml。
5、操作指南
A、实验所需器材但试剂盒不提供
1） 酶标仪（450nm）
2） 微量移液器和取样吸头
3） 带刻度的量筒与烧杯
4） 蒸馏水
5） 温育器（37℃±1℃）
6） 冷床箱（4℃）
7） 坐标纸（log/log）
8） 吸水纸
9） 用于稀释标准品的试管
10） 洗涤瓶
11） 酶标抗体稀释的一次性试管
12） 提取用的Sep-Pak C-18柱和试剂，见“样品采集”
第3年
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