【产品名称】

通用名称：游离睾酮测定试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Free Testosterone ELISA

【产品规格】

96T

【预期用途】

试剂盒可用于血清和血浆中游离睾酮的体外定量检测。

【前言简介】

睾酮是来自雄性激素中的一种类固醇激素。睾酮主要由男性睾丸和女性的卵巢分泌，有一小部分由肾上腺分泌。它是一种主要的雄性激素和代谢类固醇。此激素对男性和女性的健康发展起着重要作用。仅小部分

的循环睾酮（< 1%）以未结合或游离形式存在。大部分睾酮（约60%）会紧密结合到SHBG上，而剩余部分则松散的结合到清蛋白上。结合清蛋白的睾酮和游离的睾酮都具有生物学活性，但SHBG则会抑制睾酮的生物活性。睾酮的重要作用是促进男性第二性征的发育和合成代谢，合成代谢包括肌肉质量和强度，骨密度和强度，刺激线性生长和骨的成熟。促进第二性征的发育包括性器官的成熟。男性睾酮的水平会随年龄的增加而降低。血清游离睾酮的检测已经被提议为评价生理学活性激素的一种方式。伴随多毛症（可能还会出现多囊卵巢癌）的雄性激素增多的女性血清游离睾酮浓度会增加。另外，在SHBG增加或降低的情况下（如甲状腺机能低下和肥胖），游离睾酮的检测比总睾酮的检测更有效。

【检测原理】

DRG公司游离睾酮ELISA试剂盒利用的是竞争法原理。包被板的微孔中包被有抗游离睾酮的单克隆抗体，此抗体可以识别睾酮分子上的一个抗原位点。样品中的内源性游离睾酮和辣根过氧酶标记的睾酮竞争性的结合到此上体上。温育之后，洗板除去未结合的酶标抗体。酶标物的结合量与样品中游离睾酮的浓度成反比。加物液后，所显示颜色的深度与病人血液样品中的游离睾酮浓度成反比。血液中的睾酮60%会结合到SHBG上，一小部分会结合到其它蛋白上。只有游离睾酮（<1%）的检测才可以评价激素的生物学活性。

【试剂盒组成成分】

1) 微孔板：12×8孔 包被有抗睾酮抗体

2) 标准品，6支，1ml ，0、0.2、1、4、20、100pg/ml

3) 酶联物，1支，15ml，标记辣根过氧酶的睾酮

4) 底物液，1支，15ml，H₂O₂ -TMB 0.26 g/l

5) 终止液，1支，15ml，0.15M的 H₂SO₄

6) 质控品A/B，2支，1ml 具体浓度见瓶身

7) 洗涤液 ，25ml，2支， 10倍浓缩

所需材料（未提供）

1） 可在450±10nm处读数的酶标仪

1) 移液器

2) 吸水纸

3) 蒸馏水

4) 酶标仪（450nm，620-630nm）

【储存条件】

所有试剂避光储存在2~8℃环境下时，未开封的试剂在有效期内稳定，所以不要使用过期的试剂，开封的试剂都必须储存在2~8℃的环境下，包被板必须贮存在2~8℃的环境下。试剂一旦开封，就必须小心地重新把它密封。

打开后的标准品在2~8℃下密封可保存6个月。

【样品要求】

我们可以检测空腹病人的血清睾酮，也可以检测其血浆睾酮。不要使用溶血、黄疸血、脂血样品。注意：含叠氮钠的样品不可以用于此实验。如果病人注射了可的松或天然/人工合成的类固醇，那么游离睾酮的检测结果将无临床意义。

血清：

静脉穿刺法采集全血，待其凝块，在室温下用离心机获取血清。样品未充分凝集前不要离心，接受了抗凝剂的病人样品需要更长的凝血时间。

血浆：

将全血样品收集到含抗凝剂的离心管中，并杂收集后立即离心。

样品储存

采血当天不使用的样品，必须冷冻存放在-20℃的环境下。检测前，样品避免反复冻融。

【检测方法】

洗涤液

浓缩液用蒸馏水按1:10比例稀释

稀释好的洗涤液在2~8℃下30天稳定

标准品

标准品使用前需漩涡震荡5分钟。

检测步骤

实验开始前所有试剂均需平衡至室温（建议做双孔检测）

1) 将所需数目的板条置于板架上

2) 将标准品、质控品和样品每份20μl加入到相应的微孔中（每次取样得用新的取样吸头），留一个孔做空白对照

3）4）5）6）7）8）9）

特别注意：洗涤过程中，操作正确与否明显影响检测的敏感度和精确度。

【结果计算】

1) 分别计算标准品、质控品和样品的平均吸光度值

2) 以吸光度值为Y轴，浓度为X轴，绘制一条平均吸光度的标准曲线图。

3) 用每一样品的平均吸光度值在标准曲线上找出其相应的浓度。可根据经验、计算机辅助软件或其他数据分析方法进行计算。

4) 自动方法：计算机用4参数对数曲线可获得良好的检测结果。

5) 样品浓度可直接在标准曲线上读取。游离睾酮浓度高于最高标准的样品必须用样品稀释液进一步稀释。浓度计算时，此稀释因子应当考虑进去。