人骨桥蛋白(OPN)酶免试验试剂盒

（日本IBL 27158）

简介

骨桥蛋白（OPN）来源于骨基质，是一种分泌型糖蛋白。目前已发现多个细胞分泌高酸性的钙结合的糖基化磷蛋白，包括骨细胞，肾小管细胞，巨噬细胞，活化的T细胞和血管平滑肌细胞。分子量的大小取决于其糖基化和磷酸化程度，范围为66~44kDa

OPN的一个重要特点是含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）序列，如纤维蛋白，连蛋白和其他胞外蛋白，通过该序列可与细胞表面整合素受体结合，如αvβ3

另一重要特点，由于RNA连接，糖基化，磷酸化，硫酸化和对蛋白酶的敏感度不同，OPN在机体内以多种分子形式存在。OPN和凝血酶同时存在于受伤，炎症，血管再生和肿瘤组织位点。OPN易水解，这一过程可能有着重要的生理学意义。OPN片段的氨基末端含有一个隐藏的结合位点，可识别整合素α9β1，而且OPN还含有多个细胞结合位点，与多个受体反应；这些反应都有着不同的功能

实验原理

此试剂盒根据酶免法的夹心原理，利用两种不同的高特异性抗体，TMB作为着色剂，颜色强度与人OPN的量成正比

两种抗体如下：

包被抗体：抗人OPN(O-17)兔IgG，抗体反应部分，人OPN的N-端标记抗体

HRP标记的抗人OPN（10A16）小鼠IgG Fab’， 抗体反应部分，人OPN凝血酶裂解位点的右侧

检测范围

5~320ng/mL(76.9~4920pg/mL)

预期用途

仅供研究，不能用于诊断

1. 此试剂盒可用于EDTA-血浆，尿液或细胞上清中人OPN的体外定量检测。由于OPN分子是不稳定的蛋白，请在使用前将其储存于-80℃，放置室温或反复冻融会使检测值降低
2. 建议EDTA-血浆样品用EIA缓冲液或PBS5~10倍的稀释，如果5~10倍的稀释还是超出了zui高标准品值，则需进一步稀释
3. 血清或肝素血浆样品的检测结果可能不是正确值，因为OPN不稳定，易被凝血酶裂解，而且OPN分子上有若干个肝素结合位点，所以肝素血浆也会影响试验
4. 建议尿液样品用EIA缓冲液或PBS200倍稀释，但各实验室应*化稀释率。由于尿液样品易分解，建议加入PMSF（蛋白酶抑制剂）等。样品采集后不能立即检测，应贮存于-80℃或更低，避免反复冻融，否则其检测值降低。尿液中OPN的量与尿液的体积成反比，建议用肌酸酐补偿进行检测
5. 细胞上清的稀释比例因细胞而异，各实验室以*化稀释比例稀释
6. 此试剂盒不能检测凝血酶裂解的人OPN
7. 重组的和天然的人OPN都可用此试剂盒检测

试剂盒组成

1. 包被板，96孔，包被有抗人OPN（O-17）兔IgG，亲和纯化
2. 标记抗体浓缩，30X，0.4mlx1，HRP标记的抗人OPN（10A16）小鼠IgG Fab’，亲和纯化
3. 标准品，0.5mlx2，重组人OPN
4. EIA缓冲液，30mlx1，0.05%吐温20的PBS
5. 标记抗体稀释液，12mlx1,1%BSA，含0.05%吐温20的PBS
6. 着色剂，15mlx1，TMB底物液
7. 终止液，12mlx1，1N硫酸
8. 洗涤缓冲浓缩液，50mlx1, 40X，含0.05%吐温20的磷酸缓冲液