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MTT溶液(5mg/ml)
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详细内容
产品名称:MTT溶液(5mg/ml)
规格:5ml
储存条件:-20℃,避光
有效期:12个月
用途:MTT又称四氮唑盐,常用于细胞增殖及细胞毒性检测
产品简介:
MTT 比色法是一种检测细胞存活和生长的方法,MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测,MTT 检测原理在于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为水不溶性的蓝紫色 Formazan 并沉积在细胞中,而死细胞无此功能,在特定溶剂(如DMSO)存在的情况下,可以被溶解,然后通过酶标仪可以测定 570nm 波长附近的吸光度,细胞增殖越多越快,则吸光度越高;细胞毒性越,则吸光度越低。
自备材料:
1、 细胞培养液、胰蛋白酶消化液、DMSO 或 Formazan Solvent
2、 低速离心机、96 孔培养板、细胞计数板或计数器、摇床、显微镜、酶标仪
操作步骤(仅供参考):
1、细胞用含血清的培养液培养至对数生长期,常规胰蛋白酶消化液消化细胞(悬浮细胞无需消化)。
2、低速离心,收集细胞沉淀。
3、用培养液重悬细胞沉淀,制备成单细胞悬液,并计数。
4、细胞接种于 96 孔培养板,一般接种密度为 3000~10000 /孔,通常细胞增殖实验每孔加 3000 个细胞,细胞毒性实验每孔加入 6000 个细胞即可,具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的小,细胞增殖速度的快慢等决定。
5、37℃ 5%CO2 继续培养或按照实验具体需要进行培养,一般培养6~24h。
6、按照实验具体要求,给予 0~20µl 干预药物处理,37℃ 5%CO2继续培养至合适时间。
7、弃培养液,每孔加入 10µl MTT Solution 和 100µl 新鲜培养液,在细胞培养箱内继续孵育 4h。
8、弃培养液,每孔加入 110µl DMSO,置摇床上低速振荡 10 min,使结晶物充分溶解;如果紫色结晶较小或较少,溶解的时间会短一些;如果紫色结晶较或较多,溶解的时间会长一些。
9、在酶标仪 570nm 测定各孔吸光度。
注意事项:
1、 MTT Solution(5mg/ml)为黄色,需避光保存,长时间光照会导致失效。尽量减少反复冻融的次数,以免失效,当颜色变为灰绿色时,请勿使用。
2、 由于使用 96 孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,应注意蒸发问题。
3、 MTT Solution 在低温情况下会凝固,使用前请置于室温或 20~25℃水浴至全部融解后使用。
4、 观察 Formazan 是否溶解,亦可以借助光学显微镜观察。
5、 培养细胞时尽量细菌避免污染。
6、 应注意 OD 调零孔和对照。
7、 试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。
8、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
9、 本产品仅供科研实验用,不做其他用途。
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