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精子细胞BWW培养基储存液
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详细内容
产品名称:精子细胞BWW培养基储存液
规格:500ml
储存条件:2-8℃
有效期:12个月
用途:精子细胞BWW培养基
产品简介:
正常精液是一种混合物,在射精时由睾丸和附睾的分泌物及悬浮其中的精子与前列腺、精囊腺和尿道球腺的分泌物混合而成,终射出的混合物是一种粘稠的液体,精子分析的方法有很多,其中可通过培养进行检测。
精子细胞 BWW 培养基储存液主要由氯化钠、氯化-钾、氯化钙、硫酸镁、酚红等组成,不含葡萄糖、丙酮酸钠、BSA 等以及抗生素,是一种旨在用于广谱动物和人体精子细胞获能处理的常用营养液,一般加入葡萄糖、丙酮酸钠、BSA 等以及抗生素就成为精子细胞 BWW 培养基,又称获能培养液,其化成分配方依据 Biggers-Whitten- Whittingham(BWW)研究小组在 1971 年发表的成果,适合于各种动物和人体精子细胞处理,该试剂经无菌处理。
自备材料:
1、 无菌离心管、离心机、细胞培养箱
操作步骤(仅供参考):
1、取干净的精液样本室温放置 30~60min,使之充分液化。
2、制备精子细胞(仅供参考,不是必须步骤):1)上泳法:取一个无菌的 15ml 锥底离心管,加入 1ml 液化的精液,在其上方轻轻加入Earle 培养液 1.2ml,45°倾斜试管,37℃孵育 1h,轻轻竖立试管,取出上层的1ml液体,加入 8ml 增补的 Earle 培养液稀释,500g 离心 5min,弃上清。加入Earle 培养液 0.5ml 重新悬浮细胞,用于精子密度或功能的评估。2)非连续密度梯度法:取一个无菌的 15ml 锥底离心管,加入 3ml 80%的Percoll,轻轻加入 3ml 40%的 Percoll 于 80%的 Percoll 液面上,小心操作,不要打乱两种液体的界面。轻轻加入 1~2ml 精液于梯度溶液上,500g 离心 20min,弃上清,将管底的精子团重新悬浮于 5~10ml 的 Earle 培养液中,500g 离心 5min,弃上清,加入1mlEarle培养液,重新悬浮。
3、将含有精子细胞的离心管置于 37℃含 5%CO2、95%空气的细胞培养箱中孵育1h,如无上述培养箱,可将离心管密封加盖,置于 37℃的普通培养箱内孵育,在孵育过程中多数活动的精子从精浆中游离到覆盖上面的培养液内。
4、500g 离心精子悬液 5min,使精子细胞密度接近于 10×106/ml,将精子重悬于0.5-1ml精子细胞 BWW 培养基(需要葡萄糖、丙酮酸钠、BSA 等以及抗生素称为活能培养液)中,并在 37℃含 5%CO2、95%空气的细胞培养箱内孵育 18~24h;如无上述培养箱,可将离心管密封加盖,置于 37℃的普通培养箱内孵育。注意:在孵育过程中将试管20°倾斜。
注意事项:
1、注意无菌操作,尽量避免污染。
2、如无 Earle 培养液和增补的 Earle 培养液,可用精子细胞 BWW培养基代替。
3、试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5、本产品仅供科研实验用,不做其他用途。
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