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伴刀豆球蛋白A琼脂糖凝胶FF
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详细内容
伴刀豆球蛋白A琼脂糖凝胶FF
ConA NUPharose FF
产品介绍
ConANUPharose FF 是将刀豆蛋白A(ConcanavalinA,简称 ConA)键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质,主要用于各种带甘-露醇及葡萄糖残基的糖蛋白(包括糖蛋白病毒)、多糖和糖脂的分离和纯化。ConA 是从刀豆中提取出来的一种四聚体金属蛋白,是凝集素的一种,在 Mn?和 Ca?存在的情况下,可结合 α-D-吡喃甘露糖基、a-D-吡喃葡萄糖基和具有 C-3、C-4 或 C-6 羟基空间相关残基的分子。
ConA NUPharose FF 的应用领域还包括酶-抗体偶联物的纯化、IgM 的纯化、洗涤剂溶解的膜中细胞表面糖蛋白的分离纯化、膜囊泡的分离以及含碳水化合物物质组成变化的研究等。

1色谱柱装填
(1)需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体做脱气处理。
(2)填料用量计算:通过沉降定量填料体积,需要的沉降填料体积=柱体积X压缩
比(也称压缩因子)。沉降体积是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降读取的稳定
体积。ConANUPharose FF的压缩比为1.15。为使达到装柱比,可通过柱头下压的方法,
也可以通过高流速压柱。
以下阐述与层析系统连接时,填料的色谱柱装填方法。
(3)填料清洗:将填料悬液充分摇匀后量取相应体积,抽滤除去液体,并用约3倍
填料体积的纯化水洗涤,重复3次,以除去保存液。
(4)装柱填料悬液准备:将填料转移到适当的容器中,加入适量的装柱液,制成
50~75 v%的装柱填料悬液,使用前搅匀。
(5)装填前准备:在清洗干净的层析柱下端加入装柱液,以除去下垫片及层析柱下
端的空气,在柱内保留少量的蒸馏水,拧紧下堵头,调整柱子使其垂直于地面。
(6)装填:将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内(必要时使用装柱器),
为避免引入气泡,应使之沿层析柱内壁自然流下。将填料加入后,用装柱液将装柱
器加满,拧紧装柱器上盖,将柱子与层析系统连接。
(7)压柱:使柱内填料自然沉降(或 10~20cm/h的低流速下沉降),待填料沉降完
全后(填料与液体的界面清晰),去除装柱器,装上上柱头,并将柱头下降至界面处;通
过高流速(推荐流速见下表,注意柱压不超过0.3MPa),继续压柱至界面清晰稳定,标
记界面稳定时的柱高。停泵,打开柱头上的阀门/堵头,关闭柱底的阀门/堵头,下压柱头
至标记位置下方与压缩比对应的位置,旋紧柱头,装柱完成。装柱完成后,需用高流速
平衡柱内的填料。
伴刀豆球蛋白A琼脂糖凝胶FF
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